[發明專利]一種瞬時靶向干擾HS3ST5基因表達的siRNA及其應用

在審

• 申請號: 202211248010.8
• 申請日: 2022-10-12
• 公開（公告）號: CN116144655A
• 公開（公告）日: 2023-05-23
• 發明（設計）人: 白興文;黃磊;盧曾軍;袁紅;宮曉華;劉在新;李平花;孫普;包慧芳;李冬;馬雪青;陳應理;曹軼梅;付元芳;張婧;鄧欣雨;焦云娟;楊宇軒
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/11;C12Q1/6851;G01N33/573;A61K31/7088;A61P31/14
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 薛紅凡

本發明提供了一種瞬時靶向干擾HS3ST5基因表達的siRNA及其應用，屬于干擾RNA技術領域。本發明提供了一種瞬時靶向干擾HS3ST5基因表達的siRNA，同時所述siRNA靶向干擾HS3ST5基因表達的試劑在制備抗病毒感染的藥物中的應用。通過敲低HS3ST5基因或蛋白的表達，使宿主細胞對病毒的吸附、內化和病毒基因復制和子代病毒生成方面均有降低作用，可見本發明證明通過沉默HS3ST5基因表達或降低HS3ST5蛋白的表達能提高宿主細胞對病毒感染的抗性，從而為開發新型廣譜抗病毒藥物提供參考。

技術領域

本發明屬于干擾RNA技術領域，具體涉及一種瞬時靶向干擾HS3ST5基因表達的siRNA及其應用。

背景技術

RNA干擾(RNAi)指雙鏈RNA誘導產生的基因沉默現象。小干擾RNA(siRNA)的概念于1999年被首次提出，科研人員發現植物中自然產生的siRNA能引起轉錄后的基因沉默。siRNA長約21～25bp，可特異性與目的基因轉錄產物mRNA結合并使之降解，從而產生靶向干擾基因表達的作用。siRNA的作用機制為：攜帶有外源siRNA的序列或細胞內源性RNA被Dicer酶分解形成功能性siRNA序列，隨后與細胞中的蛋白組成RNA誘導的沉默復合物(RISC)，siRNA序列引導RISC識別結合并酶切靶標mRNA，產生干擾蛋白表達的效應，最終siRNA被細胞質中的核酸酶非特異性的降解。siRNA的這種易被核酸酶降解的特性一直以來限制了siRNA在臨床疾病治療中的應用，近期FDA批準了首個siRNA衍生療法，表明siRNA介導的基因治療正在向臨床應用過度。隨著新型核酸遞送介質的加速研發，siRNA的應用潛力將得到挖掘。

細胞表面受體與病毒之間的特異性相互作用決定了病毒感染的趨向性。硫酸乙酰肝素(HS)是一類線性硫酸化的異構多糖，在生理條件下攜帶大量的負電荷，通過弱相互作用識別并結合呈現正電荷特性的病毒蛋白，促進病毒粒子與特定入胞受體的結合。因此，HS是極具吸引力的病毒結合靶點，參與起始病毒與靶細胞的相互作用，在病毒感染方面具有重要作用。HS已被證明能夠輔助包括嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒2(SARS-CoV-2)、1型單純皰疹病毒(HSV-1)和口蹄疫病毒(FMDV)等多種病毒入胞，顯著影響病毒的感染程度。硫酸乙酰肝素3-O-硫酸基轉移酶(HS3ST)是HS生物合成的關鍵酶，其中HS3ST5的生物活性最強。HS3ST5修飾后的HS可結合HSV-1包膜糖蛋白gD，促進病毒入侵宿主細胞。因此，HS3ST5可作為潛在的抗病毒藥物靶點。

已有的研究表明人工合成的siRNA能夠引起多種細胞內的基因沉默現象，表明將合成的靶基因siRNA遞送入細胞內能人為引起可控的基因干擾現象。然而目前還沒有關于靶向干擾HS3ST5基因的siRNA的報道。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種瞬時靶向干擾HS3ST5基因表達的siRNA，應用于拮抗FMDV等諸多利用HS作為受體的病毒感染，為開發新型廣譜抗病毒藥物提供參考。

本發明提供了一種瞬時靶向干擾HS3ST5基因表達的siRNA，所述siRNA的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:5所示。

本發明提供了一種靶向沉默HS3ST5基因的試劑盒，包括所述siRNA和轉染試劑。

優選的，所述試劑盒還包括驗證HS3ST5基因或HS3ST5蛋白表達的試劑。

優選的，所述驗證HS3ST5基因表達的試劑包括RT-qPCR檢測HS3ST5基因的引物和RT-qPCR檢測試劑；

所述RT-qPCR檢測HS3ST5基因引物包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2所示的反向引物。

優選的，所述驗證HS3ST5蛋白表達的試劑包括抗HS3ST5蛋白抗體。

本發明提供了一種靶向干擾HS3ST5基因表達的試劑在制備抗病毒感染的藥物中的應用，所述試劑為所述siRNA。