[發明專利]一種可表達乳糖酶與蛋白酶的黑曲霉菌株及其應用

有效

• 申請號: 202211246417.7
• 申請日: 2022-10-12
• 公開（公告）號: CN116004398B
• 公開（公告）日: 2023-06-30
• 發明（設計）人: 林新月;丁慧;曹陽;柳燕;田健;諸輝
• 申請（專利權）人: 寧波希諾亞海洋生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N9/38;C12N9/62;C12R1/685
• 代理公司: 寧波博靈知識產權代理事務所(普通合伙) 33424
• 代理人: 唐澎淞

本發明屬于微生物領域，公開了一種可表達乳糖酶與蛋白酶的黑曲霉菌株，該菌株為曲霉屬真菌的黑曲霉（Aspergillus?niger），保藏日期為2022年8月24日，保藏單位為中國典型培養物保藏中心（CCTCC），保藏編號為CCTCC?NO：M?20221322，核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示，該菌株應用于表達乳糖酶和/或蛋白酶時，所得乳糖酶穩定性較好，蛋白酶活性較高，在工業生產中有較大的優勢。

技術領域

本發明涉及微生物領域，具體講是一種可表達乳糖酶與蛋白酶的黑曲霉菌株及其應用。

背景技術

乳糖酶，即β-半乳糖苷半乳糖水解酶(β-galactoside?galactohydrolase，E.C.3.2.1.23)，具有催化乳糖水解生成半乳糖和葡萄糖并且具有一定的轉糖基活性。乳糖酶在食品、醫藥、環境等領域都有廣泛的應用，在食品和醫藥上主要用來解決乳糖不耐癥。乳糖酶的天然來源十分豐富，廣泛分布在動物、植物和微生物中，但目前研究發現，僅有微生物產生的乳糖酶在工業上具有應用價值。其中，黑曲霉、米曲霉等霉菌沒有在安全性試驗中出現過中毒的現象，被認為是安全菌株。

蛋白酶是一類具有重要商業應用價值的酶制劑，根據來源不同，可以分為動物蛋白酶、植物蛋白酶和微生物蛋白酶。其中，微生物蛋白酶在食品和醫藥等領域有著廣泛的應用。微生物可以以農副產品為原料發酵生產蛋白酶，生產成本低，且容易進行人工改造。其蛋白酶具有廣泛的底物特異性，并且因微生物生活環境多樣，酶的適應性也十分廣泛。按照反應最適pH分類，又可將蛋白酶分為酸性、中性和堿性，其中，酸性蛋白酶已被廣泛應用于食品、醫藥、皮革等產業，在酒類、醬油釀造等生產領域和皮革處理等工藝中發揮著明顯的經濟效應。

因此篩選出一種即可表達高穩定性乳糖酶又可表達高活性蛋白酶的黑曲霉菌株對工業化生產乳糖酶和蛋白酶具有重要的意義。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是，克服以上現有技術的缺點：提供一種即可表達高穩定性乳糖酶又可表達高活性蛋白酶的黑曲霉菌株及其應用。

本發明的技術解決方案如下：一種可表達乳糖酶與蛋白酶的黑曲霉菌株，該菌株為曲霉屬真菌的黑曲霉(Aspergillus?niger)，保藏日期為2022年8月24日，保藏單位為中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，保藏編號為CCTCC?NO：M20221322。

所述可表達乳糖酶與蛋白酶的黑曲霉菌株的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。

本發明提供一種所述的可表達乳糖酶與蛋白酶的黑曲霉菌株的應用，用于表達乳糖酶和/或蛋白酶。

所述黑曲霉菌株表達的乳糖酶酶活適應反應溫度為50-80℃。

所述黑曲霉菌株表達的乳糖酶酶活最適反應溫度為70℃。

所述黑曲霉菌株表達的乳糖酶在20-70℃熱穩定性良好。

所述黑曲霉菌株表達的乳糖酶酶活最適反應pH為4。

所述黑曲霉菌株表達的蛋白酶酶活最適反應溫度為60℃。

所述黑曲霉菌株表達的蛋白酶在20-60℃熱穩定性良好。

所述黑曲霉菌株表達的蛋白酶酶活最適反應pH為3。

本發明的有益效果是：本發明分離和鑒定了一株黑曲霉菌株，其保藏編號為CCTCCNO：M?20221322，保藏日期為2022年8月24日，保藏單位地址為中國，武漢，武漢大學。該菌株應用于表達乳糖酶和/或蛋白酶時，所得乳糖酶穩定性較好，蛋白酶活性較高，在工業生產中有較大的優勢。

附圖說明

圖1為實施例4中黑曲霉菌株在PDA固體培養基上培養5d時的菌落形態；左圖為正面，右圖為反面；

圖2為實施例4中黑曲霉菌株在顯微鏡下的形態圖；