[發明專利]急性肝胰腺壞死病(VpAHPND)病原核酸檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202211241471.2
• 申請日: 2022-10-11
• 公開（公告）號: CN115595373A
• 公開（公告）日: 2023-01-13
• 發明（設計）人: 黎梅連;溫建新;付雨思;莊其山
• 申請（專利權）人: 百吉泰（廈門）醫學科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 福州順升知識產權代理事務所(普通合伙) 35242
• 代理人: 林志杰

本發明提供了急性肝胰腺壞死病(VpAHPND)病原核酸檢測試劑盒，包含正向引物、反向引物和熒光標記探針，其中引物和探針如下：正向引物Vea005：5′?aaatcacatgtggtacaac?3′；反向引物Vea006：5′?cgactagcgccattgttaat?3′；探針Vea004：5′tgaaacttaccatttacaacgcc?3′；所述試劑盒還包含VpAHPND_PCR反應液、VpAHPND陽性質控品和VpAHPND陰性質控品。本發明通過熒光PCR法，Taqman探針技術，達到高靈敏度、高度特異性、重復性好、快速高效、可進行多重定量的檢測方法，其方法更適合病原體入侵后的早發現早治療的獸醫體外診斷需求，為目前養殖業預防和早期診斷提供高精準的技術平臺。

技術領域

本發明涉及檢測試劑盒技術領域，具體為急性肝胰腺壞死病(VpAHPND)病原核酸檢測試劑盒。

背景技術

目前養殖行業用得比較多的是膠體金法、Elisa法等，其方法的靈敏度和陽性符合率均比熒光PCR法，“ELISA，即酶聯免疫吸附實驗，其基本原理是將一定濃度的抗原或者抗體通過物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入待檢標本，通過酶標物顯色的深淺間接反映被檢抗原或者抗體的存在與否或者量的多少?！保洳贿m合畜牧類病毒感染后的早起診斷，錯失了最佳了治療或處理時間。

發明內容

本發明的目的在于提供急性肝胰腺壞死病(VpAHPND)病原核酸檢測試劑盒已解決目前養殖行業的檢測方法不適當的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：急性肝胰腺壞死病(VpAHPND)病原核酸檢測試劑盒，包含正向引物、反向引物和熒光標記探針，其中引物和探針如下：

正向引物Vea005：5′-aaatcacatgtggtacaac-3′；

反向引物Vea006：5′-cgactagcgccattgttaat-3′；

探針Vea004：5′tgaaacttaccatttacaacgcc-3′；

所述試劑盒還包含VpAHPND_PCR反應液、VpAHPND陽性質控品和VpAHPND陰性質控品。

所述VpAHPND_PCR反應液主要成分為dUTP、dATP、dGTP、dCTP、MgCl2、ASFV引物及探針、IC引物及探針、熱啟動核酸聚合酶、UNG酶。

所述VpAHPND陽性質控品主要成分為ASFV質粒、陰性基質、緩沖液。

所述VpAHPND陰性質控品主要成分為陰性基質、緩沖液。

所述熒光定量PCR檢測的反應體系為8-20μl，包括5×HS HiTaq Buffer 6～12uL，Solution I(10×)2～7uL，dATP 200～500uM，dUTP 200～500uM，dGTP 200～500uM，dCTP200～500uM，EP001 0.1～0.5uM，EP002 0.1～0.5uM，EP003 0.1～0.5uM，Hotstart HiTaqDNA Polymerase 0.02～0.06U/uL，UNG酶0.02～0.06U/uL。

所述熒光定量PCR檢測的反應條件為50℃反應3min一個循環，95℃預變性3min一個循環，94℃變性和60℃熒光信號采集30S45個循環，25℃儀器冷卻30S一個循環。

與現有技術相比，本發明的有益效果是：本發明通過熒光PCR法，Taqman探針技術，達到高靈敏度、高度特異性、重復性好、快速高效、可進行多重定量的檢測方法，其方法更適合病原體入侵后的早發現早治療的獸醫體外診斷需求，為目前養殖業預防和早期診斷提供高精準的技術平臺。

附圖說明

圖1為本發明引物和探針序列圖；

圖2為本發明Buffer配置圖；