[發明專利]一種開放式培養生姜試管苗的方法

在審

• 申請號: 202211237430.6
• 申請日: 2022-10-10
• 公開（公告）號: CN115589945A
• 公開（公告）日: 2023-01-13
• 發明（設計）人: 蔡小東;趙小琴;姜棟柱;向元園;李港;余雙迎;張一鳴;胡柳;賈切;朱永興;劉奕清
• 申請（專利權）人: 長江大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 重慶信必達知識產權代理有限公司 50286
• 代理人: 李小偉

1.一種開放式培養生姜試管苗的方法，其特征在于，所述開放式培養生姜試管苗的方法包括：

洗凈的生姜根莖表面消毒后，用清水洗凈，然后置于濕沙中催芽；

制備生姜提取液和益培隆母液，配置復配抑菌劑；

組培瓶洗凈晾干后用紫外燈殺菌，配置含有復配抑菌劑的叢生芽誘導培養基、增殖及壯苗培養培養基；

接種室用降塵滅菌后再用紫外線燈照射，接種用具用乙醇消毒后浸泡于復配抑菌劑水溶液中；

生姜根莖萌發的嫩芽經升汞溶液消毒后用手術刀剝去外層葉鞘，切割的芽尖接種于叢生芽誘導培養基中培養；

誘導的叢生芽修整為微型團塊，轉接至增殖及壯苗培養基中培養；

再生的無菌苗洗凈根部培養基，移栽至裝有育苗基質的穴盤中，澆透水后置于智能玻璃溫室中進行煉苗，待小苗有新葉長出時可定植于田間。

2.如權利要求1所述開放式培養生姜試管苗的方法，其特征在于，所述生姜根莖催芽方法包括：將洗凈的生姜根莖用1000倍稀釋的多菌靈浸泡30min，清水洗凈后置于滅菌后的沙子中，加入適量自來水以保持濕度，在25±2℃黑暗的條件下催芽20-30d。

3.如權利要求1所述開放式培養生姜試管苗的方法，其特征在于，所述復配抑菌劑配置方法包括以下步驟：

步驟一，姜塊洗凈去皮后切成5mm厚姜片，置于恒溫干燥箱內60℃條件下烘12h，用粉碎機粉碎，60目過篩后稱重姜粉，按料液比1：10(g/mL)加入50ml 70％乙醇溶液浸泡0.5h，用索氏提取器回流直至提取器中液體為無色，提取溫度為60℃，經0.22um孔徑濾膜過濾得黃色油狀物粗提液；平行提取多份，合并粗提液，用旋轉蒸發儀旋轉蒸發(溫度45℃)至乙醇揮發完全；膏狀物用50％乙醇作溶劑配制成1g(姜粉質量)/mL的生姜提取物溶液，置4℃冰箱保存；

步驟二，將益培隆B瓶白色粉末溶解于益培隆A瓶緩沖液中，加10mL蒸餾水稀釋成濃度為4.35×10⁴mg/L的母液；

步驟三，取12.5mL上述生姜提取物溶液、1.0mL益培隆母液、0.05ml濃度為10％的次氯酸鈉溶液，混合后用蒸餾水定容至100mL，即為復配抑菌劑水溶液。

4.如權利要求1所述開放式培養生姜試管苗的方法，其特征在于，所述培養基配置方法包括：用于叢生芽誘導、增殖及壯苗培養的培養基在添加各組分后加熱至沸騰，于培養基溫度降至50℃時向培養基中加入1mL/L復配抑菌劑，混勻后立即分裝至預先洗凈晾干且用紫外燈殺菌30min后的罐頭瓶或三角瓶中，不用進行高溫高壓滅菌。

5.如權利要求1所述開放式培養生姜試管苗的方法，其特征在于，所述接種室和接種用具消毒方法包括：接種室用75％乙醇噴霧降塵滅菌后再用紫外線燈照射30min，接種用具用75％乙醇消毒后浸泡于1.0％(v/v)的復配抑菌劑水溶液中至少1h以上，且接種時一直浸泡于該抑菌劑水溶液中。

6.如權利要求1所述開放式培養生姜試管苗的方法，其特征在于，所述生姜叢生芽誘導方法包括：取生姜根莖催芽所新萌發的的1.5～2cm長的嫩芽，用自來水沖洗15min后用70％乙醇浸泡15s，再用0.1％(m/v)升汞溶液浸泡12min，消毒處理后用無菌水沖洗5次，再用無菌濾紙吸干嫩芽表面的水分；用手術刀剝去外層葉鞘，切割0.3-0.5cm長的芽尖接種于MS+0.5mg/L NAA+2.0mg/L 6-BA+1mL/L復配抑菌劑+30g/L蔗糖+7.0g/L瓊脂(pH 5.8)的叢生芽誘導培養基中，培養于光照強度2000lx左右、光周期14h/10h、溫度25℃±2℃的培養室內。

7.如權利要求1所述開放式培養生姜試管苗的方法，其特征在于，所述生姜增殖及壯苗培養方法包括：叢生芽誘導2個月后，將誘導的叢生芽基部0.5cm以上部分切除，形成微型團塊轉接至MS+1mg/L 6-BA+0.2mg/L IBA+1mL/L復配抑菌劑+30g/L蔗糖+7.0g/L瓊脂(pH5.8)的增殖及壯苗培養基上；每2個月繼代培養1次，培養條件為光照強度2000lx左右、光周期14h/10h、溫度25℃±2℃的培養室內，繼代培養2次后小苗可進行馴化移栽。

8.如權利要求1所述開放式培養生姜試管苗的方法，其特征在于，所述生姜試管苗馴化移栽方法包括：增殖及壯苗培養2個月后，待苗高5-6cm后打開罐頭瓶瓶蓋，注入少量自來水以讓無菌苗慢慢適應有菌環境，3d后用自來水洗凈無菌苗根部培養基，將小苗移栽至裝有育苗基質的32孔穴盤中，每孔栽植1株，基質為體積比為3：1的丹麥Pindstrup泥炭土和珍珠巖；澆透水后置于智能玻璃溫室中進行煉苗，馴化條件為溫度25±2℃、相對濕度80％、光強3000lx左右。