[發明專利]一種硅基普魯士藍納米酶、制備方法及其在比色檢測谷胱甘肽中的應用

在審

• 申請號: 202211226868.4
• 申請日: 2022-10-09
• 公開（公告）號: CN115753649A
• 公開（公告）日: 2023-03-07
• 發明（設計）人: 孫雪珂;呂曉成;張瑩;佟千姿
• 申請（專利權）人: 河北師范大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N21/78;B82Y30/00;B82Y40/00;B82Y15/00;C01C3/12;C01B33/18
• 代理公司: 北京成高專利代理事務所(普通合伙) 16047
• 代理人: 張杰

1.一種硅基普魯士藍納米酶的制備方法，其特征在于，具體步驟如下：

(1)制備二氧化硅球：在水中加入十六烷基三甲基溴化銨得到混合體系，然后放入水浴加熱鍋中，依次加入無水乙醇、NaOH溶液、正硅酸乙酯反應，得到二氧化硅球；

(2)制備3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)修飾后的介孔二氧化硅：將步驟(1)中獲得的二氧化硅球重新超聲分散至無水乙醇中，同時加入APTES，獲得的混和反應體系過夜攪拌，次日，進行離心洗滌，接著，將收集的沉淀分散至無水乙醇溶液內，加入硝酸銨冷凝回流反應，得到APTES修飾后的介孔二氧化硅納米材料；

(3)制備硅基普魯士藍納米酶：將檸檬酸和亞鐵氰化鉀K₄[Fe(CN)₆]混合得到A液，然后將水浴鍋調至60℃，將水、FeCl₃·6H₂O、步驟(2)中APTES修飾后的介孔二氧化硅納米材料加入，攪拌溶解，再加入檸檬酸攪拌，再滴加A液攪拌，攪拌完成后，再轉移至室溫條件下攪拌，得到硅基普魯士藍納米酶。

2.根據權利要求1所述的一種硅基普魯士藍納米酶的制備方法，其特征在于，所述的步驟(1)中十六烷基三甲基溴化銨的質量g：無水乙醇的體積mL：NaOH溶液的體積μL：正硅酸乙酯的體積μL為0.05～0.2：2～3：100～200：150～200。

3.根據權利要求1所述的一種硅基普魯士藍納米酶的制備方法，其特征在于，所述的步驟(1)的反應溫度為70℃，反應時間為2-3h。

4.根據權利要求1所述的一種硅基普魯士藍納米酶的制備方法，其特征在于，所述的步驟(2)中APTES的體積μL：硝酸銨的質量g為150～300：0.2～0.5。

5.根據權利要求1所述的一種硅基普魯士藍納米酶的制備方法，其特征在于，所述的步驟(2)冷凝回流的溫度為60℃，時間為6～12h。

6.根據權利要求1所述的一種硅基普魯士藍納米酶的制備方法，其特征在于，所述的步驟(3)中K₄[Fe(CN)₆]、兩次檸檬酸分別用量、FeCl₃·6H₂O的質量比為8.0～8.6：95～100：5.2～5.6。

7.根據權利要求1所述的一種硅基普魯士藍納米酶的制備方法，其特征在于，步驟(3)中在A液滴加過程中，反應體系始終處于攪拌狀態且在60℃的水浴狀態下，在A液加完后，體系在60℃下繼續攪拌3～7分鐘再轉移至室溫攪拌冷卻。

8.權利要求1所述的制備方法得到的硅基普魯士藍納米酶材料，呈直徑為110～140nm的表面粗糙的規則球形納米顆粒。

9.權利要求8所述的硅基普魯士藍納米酶材料在比色檢測谷胱甘肽中的應用。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，所述的檢測GSH含量的方法包括：將待測的GSH加入到含有硅基普魯士藍納米酶、TMB、H₂O₂的NaAc-HAc緩沖液混合體系中，在特定條件下孵育，然后檢測在652nm處的吸光度，最后計算處GSH的濃度。