[發明專利]一種基于二代測序和蛋白質組學的納米抗體生產及其應用方法

在審

• 申請號: 202211217124.6
• 申請日: 2022-09-30
• 公開（公告）號: CN115636879A
• 公開（公告）日: 2023-01-24
• 發明（設計）人: 高海東;方雷;武小龍
• 申請（專利權）人: 南京集思慧遠生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/06
• 分類號: C07K16/06;C07K1/22;C12N15/13;C12N15/85
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 陳友

1.一種基于二代測序和蛋白質組學的納米抗體生產方法，包含以下步驟：

1)抗原制備和免疫動物；

2)抗體的親和純化；

3)免疫后駱駝B細胞總mRNA的提取以及納米抗體參考蛋白庫的制備；

4)高親和力納米抗體的酶切以及蛋白質譜檢測；

5)納米抗體參考蛋白庫的搜庫和高置信度納米抗體cDNA的確定；

6)高親和力納米抗體的基因工程表達。

2.如權利要求1所述的基于二代測序和蛋白質組學的納米抗體生產方法，其特征在于，步驟3)中的動物為駱駝。

3.如權利要求1所述的基于二代測序和蛋白質組學的納米抗體生產方法，其特征在于，步驟3)中使用NGS測序制備納米抗體參考蛋白庫。

4.如權利要求1所述的基于二代測序和蛋白質組學的納米抗體生產方法，其特征在于，步驟4)中使用多酶切的方法進行高親和力納米抗體的酶切。

5.如權利要求1所述的基于二代測序和蛋白質組學的納米抗體生產方法，其特征在于，步驟4)中使用LC-MS/MS進行蛋白質譜的檢測。

6.如權利要求1所述的基于二代測序和蛋白質組學的納米抗體生產方法，其特征在于，步驟5)中使用使用ProteinPlot軟件進行納米抗體參考蛋白庫的搜庫。

7.如權利要求1所述的基于二代測序和蛋白質組學的納米抗體生產方法，其特征在于，步驟5)中利用NCBI提供的BLAST+(2.90)軟件對搜庫得到的納米抗體序列與保守的納米抗體框架序列進行比對，將比對成功的抗體序列利用IMGT提供的V-QUEST軟件重新映射(Remap)到保守的納米抗體框架序列中，根據成功映射到了的納米抗體序列返回Unigene庫中調取納米抗體的cDNA序列。

8.如權利要求1所述的基于二代測序和蛋白質組學的納米抗體生產方法，其特征在于，還包括步驟7)高親和力納米抗體的結合活性檢測。

9.一種如權利要求1所述的基于二代測序和蛋白質組學的納米抗體生產方法在抗體制備中應用。

10.一種如權利要求2-8任一項所述的基于二代測序和蛋白質組學的納米抗體生產方法在抗體制備中應用。