[發明專利]鑒別非結核、結核分枝桿菌及其利福平耐藥性的檢測方法、試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202211213829.0
• 申請日: 2022-09-30
• 公開（公告）號: CN115418407A
• 公開（公告）日: 2022-12-02
• 發明（設計）人: 易康;朱祥羽;顧立江;樊曉梅
• 申請（專利權）人: 南京諾因生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6858;C12N15/11;C12R1/32
• 代理公司: 合肥禾知知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 34246
• 代理人: 張肖肖

1.一種鑒別非結核、結核分枝桿菌及其利福平耐藥性的組合物，包括引物組和探針組，所述引物組包括：

NTM引物：

NTM-F：5’-GGAAGTYGCCAAGAAGACYGAC-3’

NTM-R：5’-CTTSAGACCCAKCGGGTT-3’

MTBC引物：

MTBC-F：5’-CAGGACCACGATCGCTGA-3’

MTBC-R：5’-TAGGTGCTGGTGGTCCGA-3

人源基因引物：

IC-F：5’-CGGAGGGAAGCTCATCAG-3’

IC-R：5’-CCCTAGTCTCAGACCTTCCCA-3’；

所述探針組包括：

NTM-fast-P：5’-CRGCGACGTTACGCAGACCTTCC-3’

NTM-slow-P1：5’-CCGTGGCCGTCGTCGTGC-3’

NTM-slow-P2：5’-CYGGCGACGGCACCACCACG-3’

MTBC-P：5’-CACAGCCCGTCCCGCCGA-3’

IC-P探針：5’-CCACGAGCTGAGTGCGTCCTGTC-3；

還包括rpoB基因內參的引物：

rpoB-F:CAGACGTTGATCAACATCCG

rpoB-R：TACGGCGTTTCGATGAAC

還包括rpoB基因探針：

rpoB-P1-516：TGGACCAGAACAACC

rpoB-P2-526：ACCCACAAGCGCC

rpoB-P3-531：CCAGCGCCGACAG

其中N代表堿基A/T/C/G，Y代表堿基C/T，S代表堿基G/C，K代表堿基G/T，R代表堿基A/G；

其中探針組中每條探針的序列兩端標記有熒光基團和淬滅基團，且IC-P探針、MTBC-P、NTM-fast-P使用不同顏色的熒光基團，NTM-slow-P1、NTM-slow-P2使用的熒光基團顏色不同于前述IC-P探針、MTBC-P、NTM-fast-P。

2.根據權利要求1所述的鑒別非結核、結核分枝桿菌及其利福平耐藥性的組合物，其特征在于：所述熒光基團選自FAM、HEX、ROX、CY5；所述淬滅基團選自BHQ1、BHQ2。

3.根據權利要求2所述的鑒別非結核、結核分枝桿菌及其利福平耐藥性的組合物，其特征在于：所述NTM-fast-P的熒光基團選用HEX，所述MTBC-P的熒光基團選用FAM，所述NTM-slow-P1、NTM-slow-P2的熒光基團選用ROX，所述IC-P探針的熒光基團選用CY5；所述rpoB-P1-516探針的兩端分別修飾FAM基團和BHQ1基團，所述rpoB-P2-526探針的兩端分別修飾HEX基團和BHQ1基團，所述rpoB-P3-531探針的兩端分別修飾ROX基團和BHQ2基團。

4.一種鑒別非結核、結核分枝桿菌及其利福平耐藥性的試劑盒，其特征在于含有權利要求1-3中任一項所述的組合物。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于所述的試劑盒包括A、B兩種反應體系，其中A體系包括分枝桿菌反應液1、無酶水、酶預混液、陽性質控品1和陰性對照；B體系包括分枝桿菌反應液2、無酶水、酶預混液、陽性質控品2和陰性對照，分枝桿菌反應液1含有權利要求1-3中任一項所述的NTM引物和探針、MTBC引物和探針及人源的引物組和探針組，分枝桿菌反應液2含有權利要求1-3中任一項所述的rpoB基因內參的引物、rpoB基因探針、人源的引物組和探針組。