[發明專利]一種腹斑倭蛙抗菌肽Nv-CATH及其基因和應用

在審

• 申請號: 202211206189.0
• 申請日: 2022-09-30
• 公開（公告）號: CN115974997A
• 公開（公告）日: 2023-04-18
• 發明（設計）人: 木麗仙;武靜;楊海龍;石潔;劉彤;楊媛
• 申請（專利權）人: 昆明醫科大學
• 主分類號: C07K14/46
• 分類號: C07K14/46;C12N15/12;A61K38/17;A61P31/04
• 代理公司: 昆明今威專利商標代理有限公司 53115
• 代理人: 喬濤

本發明涉及一種腹斑倭蛙抗菌肽Nv?CATH及其基因和應用，該抗菌肽Nv?CATH是中國兩棲類特有物種腹斑倭蛙防御肽基因編碼的一種環狀多肽，分子量3356.98道爾頓，等電點11.56，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。編碼該腹斑倭蛙抗菌肽Nv?CATH前體的基因(GenBank?accession?No.OP264074)由714個核苷酸序列組成，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2所示，其中第373–522位核苷酸為成熟腹斑倭蛙抗菌肽Nv?CATH的編碼基因。腹斑倭蛙抗菌肽Nv?CATH在制備溶血性葡萄球菌、糞腸球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、瓊氏不動桿菌和/或甲型副傷寒桿菌引起的感染疾病的治療藥物中的應用。本發明提供了一種新的具有強效廣譜抗菌活性的抗菌肽Nv?CATH。

技術領域

本發明涉及一種腹斑倭蛙(Nanorana?ventripunctata)抗菌肽Nv-CATH及其基因和應用，屬于生物醫學領域。

背景技術

近年來的研究表明，抗菌肽是所有動物、植物和微生物防御系統中的一個重要組成部分。它們是機體為抵御病原微生物侵襲而產生的一類小分子活性多肽，具有分子量小、穩定性好、殺菌迅速和不易產生耐藥性等特點。這些特性使得抗菌肽具有非常廣闊的運用前景，有望替代目前臨床上易于產生耐藥性的傳統抗生素藥物。抗菌肽不易產生耐藥性的原因是，其殺菌機理與傳統抗生素不同。它們主要是作用于細菌的細胞膜,破壞其穩定性，進而細胞膜滲透性發生改變，使得內容物外泄導致細胞死亡。不同物種來源或同一物種中抗菌肽的結構形式和生物活性差別較大。國內外研究人員一直致力于從不同物種中發掘結構新穎的抗菌肽，直接利用或者以其為模板進行分子改造。目前，已有抗菌肽用于海產品保鮮和動物飼料添加劑中。結合生態環境從各種自然資源中發掘具有潛在藥用價值的抗菌肽是目前多肽新藥研究的一個熱點。

兩棲動物是抗菌肽資源發掘中最重要的一類資源，其皮膚裸露，為抵御環境中各種微生物的侵襲，它們能夠分泌多種分子結構新穎、功能復雜多樣的的抗菌肽。這些活性多肽廣泛參與機體的各種生理活動，具有各種藥理活性，如抗微生物、抗腫瘤、抗氧化、免疫調節、創傷修復、鎮痛等作用。腹斑倭蛙常棲息于海拔高、晝夜溫差大的高原沼澤地區，這意味著隨著適應性的發展，腹斑倭蛙必然已經形成了一套有效的免疫防御系統來抵御惡劣生存環境中微生物的侵襲。腹斑倭蛙(Nanorana?ventripunctata)為兩棲綱無尾目蛙科倭蛙屬的兩棲動物，為中國特有物種，其皮膚中cathelicidin家族的強效抗菌肽尚無報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種新的具有強效廣譜抗微生物活性(包括革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌)的腹斑倭蛙抗菌肽及其基因和應用。

本發明的抗菌肽Nv-CATH是中國兩棲類特有物種腹斑倭蛙防御肽基因編碼的一種環狀多肽，分子量3356.98道爾頓，等電點11.56，多肽全序列一級結構(氨基酸序列SEQ?IDNO:1)為：

(NCNFLCKVKQRLRSVSSTSHIGMAIPRPRG)，其第2位半胱氨酸和第6位半胱氨酸組成一對分子內二硫鍵形成環狀多肽。

編碼該腹斑倭蛙抗菌肽Nv-CATH前體的基因(GenBank?accession?No.OP264074)由714個核苷酸序列組成，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2所示，其自5’端至3’端序列為：

其中，第373–522位核苷酸為成熟腹斑倭蛙抗菌肽Nv-CATH的編碼基因。

本發明的腹斑倭蛙抗菌肽Nv-CATH在制備用于治療溶血性葡萄球菌、糞腸球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、瓊氏不動桿菌和/或甲型副傷寒桿菌所引起的感染疾病的藥物中的應用。

本發明的有益效果在于：