[發明專利]近紅外熒光探針成像肝纖維化中亞鐵離子的動態波動

在審

• 申請號: 202211206104.9
• 申請日: 2022-09-30
• 公開（公告）號: CN115322165A
• 公開（公告）日: 2022-11-11
• 發明（設計）人: 趙飛翔
• 申請（專利權）人: 鎮江百單醫療生物科技有限公司
• 主分類號: C07D295/24
• 分類號: C07D295/24;C09K11/06;G01N21/64
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• 代理人: 暫無信息

本發明涉及丙二腈異弗爾酮衍生物熒光分子探針及其制備方法和應用，化合物名稱為(E)?4?(6?(2?(3?(二氰乙烯)?5,5?二甲基環己基1?1?酰基乙烯)萘?2?酰基嗎啉4?氧化物。本發明所述的化合物分子質量小，結構簡單，能作為一個分子傳感器，靈敏、有選擇性的檢測活細胞中的亞鐵離子，并開啟熒光反應。該熒光探針具有選擇性高的特點，更為突出的是，該熒光分子探針對細胞幾乎無毒且具有十分優良的細胞膜滲透作用，12 min便能透過活細胞膜，開啟熒光反應。它提供了一種新的檢測活細胞內源亞鐵離子的方法，具有十分重要的現實意義。

技術領域

本發明涉及一種丙二腈異弗爾酮衍生物熒光分子探針及其制法與在檢測肝纖維化中亞鐵離子的動態波動，顯示齊墩果酸可逆轉通過誘導鐵死亡中的應用。

背景技術

肝纖維化是一個病理生理過程，是指由各種致病因子所致肝內結締組織異常增生。任何肝臟損傷在肝臟修復愈合的過程中都有肝纖維化的過程，如果損傷因素長期不能去除，纖維化的過程長期持續就會發展成肝硬化。近年來，研究發現肝星狀細胞（hepaticstellate cells， HSCs）的活化是肝纖維化發生發展的核心環節，而靶向誘導肝星狀細胞死亡是防治肝纖維化的有效措施。鐵死亡（Ferroptosis）是近年來發現的一種全新的細胞死亡方式，是一種鐵依賴性的，區別于細胞凋亡、細胞壞死、細胞自噬的新型的細胞程序性死亡方式。因此靶向誘導HSC鐵死亡有望成為肝纖維化治療的新策略。但目前對于肝纖維化和鐵死亡兩者聯系較少，因此需要一種高效熒光探針來進一步揭示兩者之間的關系。

我們通過制備丙二腈異弗爾酮衍生物得到一種有效靈敏且低毒的熒光分子探針，同歸一系列實驗表明，該熒光分子具有良好的性能，潛在的實際應用價值很高。

發明內容

本發明的目的在于提供一種丙二腈異弗爾酮衍生物熒光分子探針及其制法與在檢測肝纖維化中亞鐵離子的動態波動的應用。

本發明的技術方案如下：

一種由丙二腈異弗爾酮衍生物熒光分子探針，其特征是它有如下結構：

一種制備上述丙二腈異弗爾酮衍生物的方法，它包括如下步驟：

步驟1. 將碳酸銫、1,1'-聯萘-2,2'-雙二苯膦和醋酸鉛溶解于甲苯中，于室溫條件和氮氣保護條件下攪拌10-15分鐘直到溶液變為紅色。將6-溴-2-萘甲醛溶解于2mL甲苯溶液后加入反應液地嗎啉溶液中。將反應液于氮氣保護條件下100℃攪拌6小時。反應完成后，混合溶液自然冷卻至室溫，用飽和碳酸氫鈉溶液淬滅反應后用乙酸乙酯-水體系進行萃取，減壓旋蒸除去溶液，粗品經硅膠柱層析純化，得到白色固體，為第一步產物；

步驟2. 將2-(3,5,5-三甲基環己-2-烯亞基）丙二腈和第一步產物加入至溶有無水乙醇的茄形反應瓶中，向其加入哌啶后加熱至80℃反應12小時。反應完畢后，使其冷卻至室溫后過濾得到深紅色固體，為第二步產物；

步驟3. 將第二步產物溶于干燥的二氯甲烷中，于冰浴條件下向其加入間氯過氧苯甲酸。通過TLC檢測反應完成后加入飽和碳酸氫鈉溶液淬滅反應，提取有機層后用飽和食鹽水洗三次后使用無水硫酸鈉干燥，粗品經硅膠柱層析純化，得到磚紅色固體，為最終產物。

本發明的優點是：本發明所述的化合物對檢測肝纖維化中亞鐵離子的動態波動具有十分靈敏的效果，并且檢驗過程快速，性能穩定，低毒等優點。實驗表明該熒光分子能夠有效快速的檢測內外源的亞鐵離子，最重要的是該熒光分子非常短的細胞膜滲透時間；本發明利用丙二腈異氟爾酮衍生物為先導化合物合成具有熒光特性的探針分子，能夠有效檢測細胞內亞鐵離子的含量，具有廣泛的應用前景。

具體實施方式

通過以下實施例進一步詳細說明本發明，但應注意本發明的范圍并不受這些實施例的任何限制。

實施例一：

(E)-4-(6-(2-(3-(二氰乙烯)-5,5-二甲基環己基1- 1-酰基乙烯)萘-2-酰基嗎啉4-氧化物的制備