[發明專利]一種Caco-2細胞倒置模型及其制備方法

有效

• 申請號: 202211202243.4
• 申請日: 2022-09-29
• 公開（公告）號: CN115369091B
• 公開（公告）日: 2023-07-28
• 發明（設計）人: 唐燦;羅波;趙建琪;羅前東;劉小英;黃凌愷
• 申請（專利權）人: 成都賽諾聯創生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12M3/00
• 代理公司: 成都華燁專利代理事務所(普通合伙) 51336
• 代理人: 孫夢婭

1.一種Caco-2細胞倒置模型的制備方法，其特征在于，其包括：

在Transwell小室的底端設置連接件，得到培養器皿，其中，所述連接件的側壁與所述Transwell小室的底壁圍合成用于培養Caco-2細胞的培養腔；

將所述培養器皿放置于第一細胞培養板內，并使所述培養器皿的培養腔開口朝上；

將Caco-2細胞接種于所述培養腔內，進行細胞培養，待所述Caco-2細胞鋪滿所述Transwell小室的底壁后，得到外側底壁貼壁生長有Caco-2細胞的所述Transwell小室；

將所述Transwell小室重新按照常規方式放置于第二細胞培養板的培養孔內，使刷狀緣向下、基底層向上，得到Caco-2細胞倒置模型。

2.根據權利要求1所述的Caco-2細胞倒置模型的制備方法，其特征在于，在制備所述培養器皿的過程中，所述連接件與所述Transwell小室的底端之間固定連接，所述固定連接的方式為焊接或者注塑成型。

3.根據權利要求1所述的Caco-2細胞倒置模型的制備方法，其特征在于，在制備所述培養器皿的過程中，所述連接件與所述Transwell小室的底端之間可拆卸連接，所述可拆卸連接的方式包括嵌套、卡扣和螺紋連接。

4.根據權利要求3所述的Caco-2細胞倒置模型的制備方法，其特征在于，在進行細胞培養過程中，待所述Caco-2細胞鋪滿所述Transwell小室的底壁后，還包含將所述連接件與所述Transwell小室分離的步驟。

5.根據權利要求3所述的Caco-2細胞倒置模型的制備方法，其特征在于，在制備所述培養器皿的過程中，對所述連接件用酒精洗滌、高溫滅菌并干燥后，再連接所述Transwell小室。

6.根據權利要求1所述的Caco-2細胞倒置模型的制備方法，其特征在于，所述連接件的長度為8～10mm。

7.根據權利要求1所述的Caco-2細胞倒置模型的制備方法，其特征在于，將所述Caco-2細胞接種于所述培養腔并進行培養的過程包括：

a.將Caco-2細胞復蘇后，加入培養液中培養，按1:1～3傳代培養；

b.在所述細胞培養板內加入細胞培養液，并使所述細胞培養液的液面與所述Transwell小室的底壁齊平；

c.將Caco-2細胞懸液的濃度調節為45～55萬個/mL后，取50～200μl接種于所述培養腔內,進行培養。

8.根據權利要求7所述的Caco-2細胞倒置模型的制備方法，其特征在于，在對Caco-2細胞進行培養的第一周，每隔2天換一次所述培養腔內的細胞培養液，第二周每天換一次所述培養腔內的細胞培養液；所述細胞培養板中培養孔的細胞培養液每隔2～4天換一次。

9.根據權利要求1所述的Caco-2細胞倒置模型的制備方法，其特征在于，所述第一細胞培養板的內徑小于所述第二細胞培養板，所述第一細胞培養板和所述第二細胞培養板均選自6孔板、12孔板、24孔板、48孔板和96孔板中的任意一種。

10.一種根據權利要求1～9任一項所述的制備方法制得的Caco-2細胞倒置模型。