[發(fā)明專利]BBD29_14255基因突變體及其在制備L-谷氨酸中的應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211198540.6
• 申請(qǐng)日: 2022-09-29
• 公開（公告）號(hào): CN116063417A
• 公開（公告）日: 2023-05-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孟剛;趙春光;楊立鵬;魏愛英;高曉航;田斌
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 內(nèi)蒙古伊品生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/34
• 分類號(hào): C07K14/34;C12N15/31;C12N15/77;C12N1/21;C12P13/14;C12R1/15
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 魏少偉

1.蛋白質(zhì)，為如下A1)或A2)或A3)：

A1)SEQ?ID?No.2所示的蛋白質(zhì)，或?qū)EQ?ID?No.2的第172位亮氨酸殘基突變?yōu)楸奖彼釟埢⒘涟彼釟埢⒗i氨酸殘基、異亮氨酸殘基、天冬酰胺殘基、絲氨酸殘基、丙氨酸殘基、甲硫氨酸殘基、脯氨酸殘基、精氨酸殘基、天冬氨酸殘基、半胱氨酸殘基、谷氨酰胺殘基、谷氨酸殘基、甘氨酸殘基、組氨酸殘基、賴氨酸殘基、色氨酸殘基或酪氨酸殘基得到的突變蛋白質(zhì)；

A2)將A1)的蛋白質(zhì)除第172位外的氨基酸序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白質(zhì)；

A3)在A1)或A2)的N端或/和C端連接標(biāo)簽得到的融合蛋白質(zhì)。

2.與權(quán)利要求1所述蛋白質(zhì)相關(guān)的生物材料，為下述B1)至B4)中的任一種：

B1)編碼權(quán)利要求1所述蛋白質(zhì)的核酸分子；

B2)含有B1)所述核酸分子的表達(dá)盒；

B3)含有B1)所述核酸分子的重組載體、或含有B2)所述表達(dá)盒的重組載體；

B4)含有B1)所述核酸分子的重組微生物、或含有B2)所述表達(dá)盒的重組微生物、或含有B3)所述重組載體的重組微生物。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的生物材料，其特征在于：B1)所述核酸分子為如下b11)或b12)或b13)或b14)或b15)或b16)：

b11)序列表中SEQ?ID?No.3所示的DNA分子；

b12)序列表中SEQ?ID?No.5所示的DNA分子；

b13)序列表中SEQ?ID?No.7所示的DNA分子；

b14)序列表中SEQ?ID?No.1所示的DNA分子；

b15)與b11)或b12)或b13)或b14)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且編碼權(quán)利要求1所述蛋白質(zhì)的DNA分子；

b16)在嚴(yán)格條件下與b11)或b12)或b13)或b14)或b15)限定的核苷酸序列雜交，且編碼權(quán)利要求1所述蛋白質(zhì)的基因組DNA分子。

4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的生物材料，其特征在于：B2)所述表達(dá)盒為SEQ?ID?No.10或SEQ?ID?No.11或SEQ?ID?No.12或SEQ?ID?No.9所示的DNA分子；

B4)所述重組微生物為將含有SEQ?ID?No.1所示的BBD29_14255基因的微生物中的BBD29_14255基因替換為SEQ?ID?No.3、SEQ?ID?No.5或SEQ?ID?No.7得到的重組微生物，或向微生物中導(dǎo)入B1)所述核酸分子并使其得到表達(dá)得到的重組微生物。

5.一種制備L-谷氨酸的方法，包括：使受體生物細(xì)胞中表達(dá)權(quán)利要求1所述蛋白質(zhì)，或提高受體生物細(xì)胞中權(quán)利要求1所述蛋白質(zhì)的含量或活性，或提高受體生物細(xì)胞中SEQ?IDNo.4或SEQ?ID?No.6或SEQ?ID?No.8或SEQ?ID?No.2所示蛋白質(zhì)的含量或活性，得到重組生物細(xì)胞；培養(yǎng)所述重組生物細(xì)胞，得到L-谷氨酸。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于：所述生物細(xì)胞為能合成L-谷氨酸的酵母、細(xì)菌、藻、真菌、植物細(xì)胞或動(dòng)物細(xì)胞。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于：所述細(xì)菌為谷氨酸棒桿菌。

8.根據(jù)權(quán)利要求5-7中任一所述的方法，其特征在于：所述方法通過向所述受體生物細(xì)胞中導(dǎo)入權(quán)利要求1所述蛋白質(zhì)的編碼基因并使其得到表達(dá)實(shí)現(xiàn)，或向所述受體生物細(xì)胞中導(dǎo)入SEQ?ID?No.4或SEQ?ID?No.6或SEQ?ID?No.8或SEQ?ID?No.2所示蛋白質(zhì)的編碼基因并使其得到表達(dá)實(shí)現(xiàn)；

或，所述受體生物細(xì)胞中含有SEQ?ID?No.1所示的DNA分子，所述方法通過將所述受體生物細(xì)胞中SEQ?ID?No.1所示的DNA分子替換為SEQ?ID?No.3或SEQ?ID?No.5或SEQ?ID?No.7所示的DNA分子實(shí)現(xiàn)。