[發(fā)明專利]用于檢測O1群霍亂弧菌的引物、試劑盒和檢測方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202211194095.6 | 申請日： | 2022-09-28 |
| 公開（公告）號： | CN116162716A | 公開（公告）日： | 2023-05-26 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 周水茂;賈西帥 | 申請（專利權(quán)）人： | 武漢市疾病預(yù)防控制中心 |
| 主分類號： | C12Q1/689 | 分類號： | C12Q1/689;C12N15/11;C12R1/63 |
| 代理公司： | 武漢知伯樂知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 42282 | 代理人： | 李金龍 |
| 地址： | 430024 湖*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 用于 檢測 o1 霍亂弧菌 引物 試劑盒 方法 | ||
本發(fā)明公開了一種用于檢測O1群霍亂弧菌的引物、試劑盒和檢測方法，本發(fā)明的檢測方法成本低、檢測時間短，操作簡單，相比于PCR檢測，本申請的試劑成本不到市場熒光PCR法的二分之一，相比于霍亂弧菌分離與鑒定方法，精度更高，極大地降低了漏檢率。本發(fā)明的試劑盒具有準(zhǔn)確率高、特異性好、靈敏度高的特點，適合大規(guī)模生產(chǎn)和應(yīng)用。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于病菌檢測技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及一種用于檢測O1群霍亂弧菌的引物、試劑盒和檢測方法。
背景技術(shù)
霍亂弧菌(Vibrio?cholerae)是人類霍亂的病原體,霍亂是一種古老且流行廣泛的烈性傳染病之一。曾在世界上引起多次大流行，主要表現(xiàn)為劇烈的嘔吐，腹瀉，失水，死亡率甚高。霍亂弧菌是革蘭氏陰性菌，菌體短小呈逗點狀，有單鞭毛、菌毛，部分有莢膜。共分為200多個血清群，其中O1群和O139群可引起霍亂。目前,霍亂弧菌的檢測多以傳統(tǒng)細(xì)菌培養(yǎng)方法為主,存在著檢出率偏低,費時費力等缺點，PCR已用于病原菌的檢測，由于眾多PCR方法的性能差異很大，不同PCR的檢測能力參差不齊，且需昂貴儀器設(shè)備，成本高，且只能在設(shè)置齊全的實驗室進(jìn)行，實驗時間長；環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增(LAMP)方法的靈敏度接近或超過PCR，作為一種快速高效的實驗方法，可肉眼觀察判斷結(jié)果，不依賴儀器設(shè)備就能實現(xiàn)現(xiàn)場快速檢測，國內(nèi)外還沒有LAMP檢測O1群霍亂弧菌研究報道。
本發(fā)明的目的是提供一種基于環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)檢測O1群霍亂弧菌引物、試劑盒和檢測方法，能夠快速、準(zhǔn)確檢測O1群霍亂弧菌，以適合霍亂流行病學(xué)調(diào)查和現(xiàn)場檢測。
發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)的以上缺陷或改進(jìn)需求，本發(fā)明提供一種用于檢測O1群霍亂弧菌的引物、試劑盒和檢測方法，能夠快速、準(zhǔn)確檢測O1群霍亂弧菌，以適合霍亂流行病學(xué)調(diào)查和現(xiàn)場檢測。
為實現(xiàn)上述目的，按照本發(fā)明的一方面，提供一種用于檢測O1群霍亂弧菌的引物，其特征在于，包括：
上游外引物F3：5’-CATTACCATTATCCATGGCC-3’，SEQ?ID?NO：1；
下游外引物B3：5’-GGCAAGTGGAATTATTTTTACCTTA-3’，SEQ?ID?NO：2；
上游內(nèi)引物FIP：
5’-AGCACTTTTGACGAATAATATCGGAGACTTTCTCTCTTTATTTGGCTC-3’，SEQ?ID?NO：3；
下游內(nèi)引物BIP：
5’-TGCCTGAATTTACAGGCTTACGCGATCGCCAACCCAAGTTGG-3’，SEQ?ID?NO：4；
反向環(huán)引物L(fēng)B：5’-ATCACCACAATATGCACACACA-3’，SEQ?ID?NO：5。
進(jìn)一步的，所述上游外引物F3和下游外引物B3用于識別O1群霍亂弧菌特異性檢測基因的靶序列。
進(jìn)一步的，所述上游內(nèi)引物FIP、下游內(nèi)引物BIP和反向環(huán)引物L(fēng)B用于擴(kuò)增O1群霍亂弧菌特異性檢測基因的靶序列。
按照本發(fā)明的第二方面，提供一種用于檢測O1群霍亂弧菌的試劑盒，包括：引物混合液，所述引物混合液包括上述的引物。
進(jìn)一步的，還包括：反應(yīng)混合液、Bst酶、指示劑、陽性對照和陰性對照；
所述反應(yīng)混合液包括：Tris-HCl、KCl、(NH4)2SO4、MgSO4、Triton-X?100和dNTPs；
所述Bst酶包括：Bst?2.0DNA?Polymerase；
所述指示劑包括：Calcein、MnCl2和DMSO；
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于武漢市疾病預(yù)防控制中心，未經(jīng)武漢市疾病預(yù)防控制中心許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/202211194095.6/2.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
