[發明專利]一種長效人重組胰高血糖素樣肽-1及其應用

在審

• 申請號: 202211188658.0
• 申請日: 2022-09-28
• 公開（公告）號: CN116063562A
• 公開（公告）日: 2023-05-05
• 發明（設計）人: 巴薩姆法瑞斯
• 申請（專利權）人: 上海延立藥業有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/85;A61K38/26;A61K47/64;A61P3/10;A61P3/04
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本發明提出了一種長效人重組胰高血糖素樣肽?1及其應用，將野生型GLP?1進行變異改造，使其不被DPP?4酶剪切，將包含一個或多個CTP的序列連接到變異型GLP?1的N端或/和C端；所述的GLP?1野生型的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示；所述的GLP?1變異型的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:2所示；所述的CTP的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:3所示。開發一種長效人胰高血糖素樣肽?1，通過HCGβ羧基末端肽（CTP）的序列連接到突變型胰高血糖素樣肽?1的編碼序列的手段。通過將一個或多個CTP序列連接到GLP?1的C端或/和N端來設計類似物。

技術領域

本發明涉及一種長效人重組胰高血糖素樣肽-1及其應用，屬于基因構建技術領域。

背景技術

胰高血糖素樣肽-1?(GLP-1)?是一種由?30?或?31個氨基酸組成的肽激素，源自胰高血糖素原肽的組織特異性翻譯后加工。它由腸內分泌L細胞和孤束核內的某些神經元在食物消耗后產生和分泌。初始產物?GLP-1?(1-37)?易被酰胺化和蛋白水解裂解，從而產生兩種截短且等效的生物活性形式，GLP-1?(7-36)?酰胺和?GLP-1?(7-37)。活性?GLP-1?由兩個α-螺旋組成，分別位于氨基酸的13-20位和24-35位，被一個連接區隔開。

GLP-1一旦分泌，會對蛋白水解酶二肽基肽酶4?(DPP-4)的催化活性極為敏感。具體來說，DPP-4?可以裂解GLP-1?Ala⁸-Glu⁹?之間的肽鍵，導致形成豐富的?GLP-1?(9-36)?酰胺，其在循環中總?GLP-1?的占比可達?60-80%。DPP-4?在多種組織和細胞類型中廣泛表達，并以膜錨定和可溶性循環形式存在。更值得注意的是，DPP-4?在內皮細胞表面表達，包括與GLP-1?分泌位點直接相鄰的細胞。

GLP-1?具有多種生理特性，使其（及其功能類似物）成為深入研究的主題，其可作為糖尿病潛在的治療方法，可以使糖尿病病情得到長期改善并具有直接的效果。它具有通過增強胰島素分泌以葡萄糖依賴性方式降低血糖水平的能力。除了促胰島素作用外，GLP-1還與許多調節和保護作用有關。與?GIP（抑胃肽）?不同，GLP-1?的作用在Ⅱ型糖尿病患者中得以保留，因此大量藥物研究已針對開發基于?GLP-1?的治療。

內源性?GLP-1?主要被DPP-4以及中性內肽酶和腎臟清除迅速降解，半衰期約為2分鐘。因此，只有10-15%的GLP-1完好無損地進入循環，導致空腹血漿水平僅為0-15?pmol/L。為了克服這個問題，已經開發了?GLP-1?受體激動劑和?DPP-4?抑制劑來增加?GLP-1?活性。與胰島素和磺脲類等常見治療藥物相反，基于?GLP-1?的治療與體重減輕和低血糖風險降低有關，這是?Ⅱ?型糖尿病患者的兩個重要考慮因素。

GLP-1?最值得注意的作用是其以葡萄糖依賴性方式促進胰島素分泌的能力。由于GLP-1?與胰腺?β?細胞上表達的?GLP-1?受體結合，受體與?G?蛋白亞基偶聯并激活腺苷酸環化酶，從而增加?ATP?生成?cAMP。隨后，包括?PKA?和?Epac2?在內的二級通路的激活改變了離子通道活性，導致細胞溶質Ca²⁺水平升高，從而增強了胰島素顆粒的胞吐作用。在此過程中，葡萄糖的流入可確保有足夠的ATP?來維持刺激作用。

本發明通過對野生型GLP-1進行變異改造和連接人絨毛膜促性腺激素β亞基的羧基末端肽（CTP）來設計新的長效?GLP-1?變體。先前已批準將?CTP?連接到蛋白質的編碼序列導致體內半衰期增加。此外，CTP顯示在人類中不具有免疫原性。

發明內容