[發明專利]牛源化鼠抗布魯氏桿菌抗體及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 202211183827.1
• 申請日: 2022-09-27
• 公開（公告）號: CN116023448A
• 公開（公告）日: 2023-04-28
• 發明（設計）人: 曹政;付利芝;付文貴;李大軍;朱買勛;李成洪;游斌杰
• 申請（專利權）人: 重慶市畜牧科學院
• 主分類號: C07K14/23
• 分類號: C07K14/23;C12N15/31;C12N1/21;C12N15/70;C07K16/12;C12N15/13;C12N5/16;C12N15/85;A61K39/40;A61P31/04;C12R1/19
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所(普通合伙) 11308
• 代理人: 黎昌莉

本發明屬于生物制藥技術領域，具體涉及的是一種牛源化鼠抗布魯氏桿菌抗體及其制備方法與應用。本發明人工合成牛種、綿羊睪丸種、犬種布魯氏桿菌OMP25蛋白的串聯表位蛋白，免疫小鼠并制備單克隆抗體，將抗體的Hv及Lv區域上CDR片段克隆到牛源IgG上相應部位，之后對重組IgG進行整體突變修飾進行牛源化改造，制得牛源化鼠抗布魯氏桿菌單克隆抗體。本發明的牛源化鼠抗布魯氏桿菌單克隆抗體制劑具有良好的免疫原性和保護效果，可在動物體內阻斷并抑制牛種、犬種、綿羊睪丸種布魯氏桿菌的繁殖與擴散。

技術領域

本發明屬于生物制藥技術領域，具體涉及的是一種牛源化鼠抗布魯氏桿菌抗體及其制備方法與應用。

背景技術

布魯氏菌病(Brucellosis)屬于重大人畜共患傳染病，對人和動物的危害都極大，與狂犬病、非典型肺炎、高致病性禽流感等同屬于乙類傳染病。目前布魯氏桿菌疫苗均為活疫苗，不僅對人與動物均有一定的致病作用，而且在免疫動物后會干擾血清學檢測并引起孕畜流產，所以目前動物布魯氏桿菌病的防控以凈化為主，同時限制布氏桿菌疫苗的使用范圍在一類地區，且不能對種畜與奶畜使用，這導致全國大部分地區只能通過監測與捕殺來達到疫病的凈化。因此目前亟需一種能夠在動物體內拮抗并阻礙布魯氏桿菌傳播的有效手段。

單克隆抗體制劑是一種有效的體內拮抗病原體的技術手段，但目前單克隆抗體技術在臨床治療應用中的進展較為緩慢，其主要原因在于單克隆抗體大多是鼠源性的，而鼠源性單克隆抗體應用于其他動物或人類治療時存在諸多問題：一是不能有效地激活機體補體和Fc受體相關的效應系統；二是被機體免疫系統所識別，產生抗原反應，并在機體循環系統中被很快清除掉。因此，為了保持單克隆抗體的抗體活性并減少或消除抗原活性，使用鼠源抗體的Fab片段與靶動物抗體的Fc片段嵌合成完整而有活性的嵌合抗體技術得到了發展。嵌合抗體或對抗體進行靶動物化改造的主體思路是以靶動物的IgG為模板，將Hv及Lv區域上保留FR片段，而將CDR片段替換為相應鼠源片段，這樣既保留了抗體的活性，又保證了抗體分子最大程度的靶動物相似性，可以在體內發揮理想的作用。

近年來，布魯氏桿菌外模蛋白OMP25成為了研究熱點，研究發現OMP25蛋白在布魯氏桿菌感染、致病過程中發揮重要作用，且參與維持細菌的外模功能性結構的穩定，與病原菌在宿主內體繁殖生長過程有關，具備重要免疫原性與抗原保護作用。因此，借助生物信息學分析等手段，尋找布魯氏桿菌外膜蛋白OMP25有臨床意義的抗原表位，制備單克隆抗體并進行靶動物化改造，即可得到同時具備良好分子活性與靶動物一致性的單克隆抗體。利用該抗體制備成體內注射制劑，將有效改善布魯氏桿菌病的防控與治療現狀，對布魯氏桿菌病的防控與凈化以及公共衛生安全具有重要意義。

公開號為CN113354742A的發明專利公開了一種布魯氏桿菌基因工程亞單位疫苗及其制備方法和應用，具體為一種原核表達的布魯氏桿菌外膜蛋白的串聯表位蛋白；該布魯氏桿菌外膜蛋白串聯表位蛋白的氨基酸序列由牛種Omp25蛋白、犬種Omp25蛋白、豬種Omp25蛋白、綿羊睪丸種Omp25蛋白、羊種Omp31蛋白等16種蛋白的氨基酸序列組成；與本專利相比，該串聯表位蛋白的氨基酸序列組成更為復雜。

發明內容

本發明的目的之一在于提供一種布魯氏桿菌外膜蛋白OMP25串聯表位蛋白，該布魯氏桿菌外膜蛋白OMP25串聯表位蛋白的氨基酸序列由牛種OMP25蛋白、犬種OMP25蛋白、綿羊睪丸種OMP25蛋白的氨基酸序列組成。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

布魯氏桿菌外膜蛋白OMP25串聯表位蛋白，所述布魯氏桿菌OMP25蛋白串聯表位蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

進一步，所述布魯氏桿菌OMP25蛋白串聯表位蛋白的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。

進一步，所述布魯氏桿菌外膜蛋白OMP25串聯表位蛋白的氨基酸序列由牛種OMP25蛋白、犬種OMP25蛋白、綿羊睪丸種OMP25蛋白的氨基酸序列組成。