[發明專利]柑橘木虱對甲氰菊酯抗性的分子標記及其應用和檢測方法

在審

• 申請號: 202211182448.0
• 申請日: 2022-09-27
• 公開（公告）號: CN116200503A
• 公開（公告）日: 2023-06-02
• 發明（設計）人: 豆威;劉天遠;高一凡;王進軍;袁國瑞
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6806;C12N15/11
• 代理公司: 重慶雙馬智翔專利代理事務所(普通合伙) 50241
• 代理人: 顧曉玲

1.一種柑橘木虱對甲氰菊酯抗性的分子標記，其特征在于：所述分子標記具有核苷酸序列如SEQ?ID?NO.9和/或SEQ?ID?NO.10和/或SEQ?ID?NO.11所示的柑橘木虱電壓門控鈉離子通道基因，

如SEQ?ID?NO.9所示的核苷酸序列編碼的氨基酸發生DcVGSC_L925M突變，

如SEQ?ID?NO.10所示的核苷酸序列編碼的氨基酸發生DcVGSC_M918T突變，

如SEQ?ID?NO.11所示的核苷酸序列編碼的氨基酸發生DcVGSC_M918L突變，

野生型柑橘木虱電壓門控鈉離子通道基因編碼的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。

2.根據權利要求1所述的分子標記，其特征在于：野生型柑橘木虱電壓門控鈉離子通道基因的序列如SEQ?ID?NO.1所示。

3.權利要求1所述的分子標記在柑橘木虱對甲氰菊酯敏感種群和抗性種群分類中的應用。

4.一種擴增權利要求1所述分子標記的特異性引物對，其特征在于：所述引物對為Dc_VGSC3_F/Dc_VGSC3_R，引物序列如下：

Dc_VGSC3_F：5’-GGCCTTGTTGCTTAGAGT-3’，

Dc_VGSC3_R：5’-GACGTCCTCTTTCACTCAAC-3’。

5.一種柑橘木虱對甲氰菊酯抗性的分子標記的檢測方法，其特征在于：先提取待測柑橘木虱的總DNA，以總DNA為模板用權利要求4中的特異性引物對進行PCR擴增，得到擴增產物Dc_VGSC基因片段，分析PCR擴增產物是否含有權利要求1所述的分子標記，即可判斷取待測柑橘木虱是對甲氰菊酯的敏感種群還是抗性種群。

6.根據權利要求5所述的檢測方法，其特征在于：分析PCR擴增產物是否含有權利要求1所述的分子標記的具體方法為:

將PCR擴增產物進行測序，與權利要求1中的柑橘木虱對甲氰菊酯抗性的分子標記進行序列比對，如果PCR擴增產物的序列與SEQ?ID?NO.9或SEQ?ID?NO.10或SEQ?ID?NO.11所示的序列相同，說明檢測的柑橘木虱屬于甲氰菊酯抗性種群。

7.根據權利要求5所述的檢測方法，其特征在于：所述PCR擴增的反應體系為12.5μL2×PrimeSTARMax?Premix、濃度為10uM的正、反向引物各1μL、2μLDNA模板，補充ddH₂O至25μL。

8.根據權利要求5至7任一項所述的檢測方法，其特征在于：所述PCR擴增的反應條件為：94℃預變性5min；94℃變性30s、60℃退火30s、72℃延伸30s、35次循環；最后72℃延伸10min。