[發明專利]一種用于母豬早期妊娠診斷的外泌體miRNA標志物及其應用

在審

• 申請號: 202211176064.8
• 申請日: 2020-06-10
• 公開（公告）號: CN116287282A
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發明（設計）人: 黃濤;高若男;李濤;邱梅玉;謝蘇;孫義姍;和軍飛;公紅斌;陳鑫;李清春;盧世豪
• 申請（專利權）人: 石河子大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/113
• 代理公司: 西安鼎邁知識產權代理事務所(普通合伙) 61263
• 代理人: 李振瑞

本發明公開一種用于母豬早期妊娠診斷的外泌體miRNA標志物及其應用，外泌體miRNA分子標志物包括ssc?miR?192、ssc?miR?146a?5p和ssc?miR?149，單獨使用血清外泌體miRNA診斷區分早期妊娠與未妊娠母豬時，ROC曲線下面積(AUC)分別為0.863、0.885、0.857；ssc?miR?192、ssc?miR?146a?5p聯合AUC為0.921；ssc?miR?192、ssc?miR?149聯合AUC為0.902；ssc?miR?146a?5p、ssc?miR?149聯合AUC為0.910，ssc?miR?192、ssc?miR?146a?5p、ssc?miR?149三種miRNA聯合時，其AUC為0.959，可見，本發明提供的外泌體miRNA分子標志物在早期母豬妊娠診斷中具有高靈敏度及高特異性，使用多個miRNA標志物聯合，具有優越的診斷性能。

本申請是分案申請，原申請的發明專利名稱為“一種用于母豬早期妊娠診斷的外泌體miRNA標志物及其應用”，原申請的申請日為2020-06-10，原申請的申請號為202010525872.5。

技術領域

本發明屬于生物技術診斷領域，具體的，本發明涉及一種用于母豬妊娠診斷的外泌體miRNA標志物及其應用。

背景技術

外泌體(Exosomes)是細胞產生釋放到細胞外環境大小為30-100nm的囊泡，普遍存在于動物的唾液、血液、尿液及乳汁等流體中。microRNAs(miRNA)是短鏈非編碼RNA，其長度約為19-22個核苷酸，通過與mRNA的3'-UTR區內部分或全部序列互補發揮調控作用，導致靶基因轉錄抑制，從而參與動物的胚胎發育。miRNA存在于外泌體的獨特形式使之成為理想的生物標志物。研究表明，Exosomes作為細胞外miRNA的一種運載形式，可以保護其內miRNA免受核糖核酸酶的降解，使得miRNA在Exosomes中高度穩定表達。Exosome中的miRNA擁有獨特的介導細胞間通信的作用，可以特異性抑制細胞中與其對應靶基因的表達。Exosomes中miRNA的在體液中獨特穩定性和時空特異性使之成為理想的新型生物標志物逐漸進入人們的視野中。

母豬的妊娠診斷一直以來都受到企業的重視，因為早期妊娠的準確診斷不僅可以縮短母豬的非生產天數(NPD)，而且還可以提高年產窩仔數和增加窩均斷奶仔豬數。如何通過有效而準確的診斷方法發現未妊娠母豬，縮短胎次間隔以及減少非生產天數(NPD)一直困擾著養豬業。

現有的妊娠診斷方法存在著各自的缺陷，如超聲波診斷受使用者的經驗程度及其檢測天數較長的影響；依據母豬發情周期以及妊娠征狀診斷，可能會存在假發情現象；激素測定則存在一定的危險性。目前還沒有一種能在妊娠早期(特別是妊娠21天以內，即配種后未妊娠母豬能再次發情的時間)進行妊娠診斷的有效方法進入實用階段。鑒于以上診斷方法存在的缺陷，我們迫切的需要找到一種更為簡單準確的妊娠診斷方法應用于生產管理。

目前關于母豬妊娠早期妊娠外泌體miRNA的研究較少，普遍存在特異性和靈敏度低、診斷價值低的問題，如何通過研究外泌體miRNA，對血清外泌體miRNA作為妊娠診斷分子標志物的研究對養殖業具有重要意義。

發明內容

針對現有技術中用于母豬早期妊娠診斷的外泌體miRNA標志物的特異性和靈敏度低、診斷價值低的技術問題，本發明旨在于提供一種用于母豬早期妊娠診斷的外泌體miRNA標志物及其應用。

本發明是通過以下技術方案實現的：