[發(fā)明專利]一種靈芝優(yōu)質(zhì)菌株HMGIM-M624的分子標(biāo)記、特異性引物及鑒定方法

在審

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• 申請日: 2022-09-23
• 公開（公告）號(hào): CN115873977A
• 公開（公告）日: 2023-03-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 寇秀穎;吳曉賢;唐健;吳清平;胡惠萍;梁曉薇;蔡曼君;謝意珍;劉遠(yuǎn)超;卓麗君;王傲;杜娜
• 申請（專利權(quán)）人: 無限極（中國）有限公司;廣東省科學(xué)院微生物研究所（廣東省微生物分析檢測中心）
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12N15/11;C12Q1/686
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 魏香琴

本發(fā)明涉及一種靈芝優(yōu)質(zhì)菌株HMGIM?M624的分子標(biāo)記、特異性引物及鑒定方法。所述靈芝優(yōu)質(zhì)菌株HMGIM?M624于2019年11月7日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏地址為廣州市先烈中路100號(hào)大院59號(hào)樓5樓，保藏編號(hào)為GDMCC No:60889；所述分子標(biāo)記為InDel分子標(biāo)記，靈芝優(yōu)質(zhì)菌株HMGIM?M624在染色體sca34的第246451?246460位的CATGCTGTA堿基缺失。本發(fā)明提供了檢測靈芝優(yōu)質(zhì)菌株HMGIM?M624分子標(biāo)記的試劑，所述試劑能夠?qū)㈧`芝優(yōu)質(zhì)菌株HMGIM?M624與11株市場主栽的靈芝品種菌株進(jìn)行區(qū)分，特異性鑒別靈芝優(yōu)質(zhì)菌株HMGIM?M624。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種靈芝優(yōu)質(zhì)菌株HMGIM-M624的分子標(biāo)記、特異性引物及鑒定方法。

背景技術(shù)

靈芝[Ganoderma lucidum(Curtis)P.Karst.]是傘菌綱[Agaricomycetes]、多孔菌科[Polyporaceae]、靈芝屬[Ganoderma P.Karst.]真菌。自《神農(nóng)本草經(jīng)》記載以來，關(guān)于其民間傳說和不斷被證實(shí)的藥用價(jià)值，靈芝在我國已有兩千多年的記載和應(yīng)用歷史，是最重要的藥用真菌之一。近些年來，特別是自2000年版《中華人民共和國藥典》收錄靈芝為法定中藥材后，科研人員對其開展了廣泛和深入的研究，靈芝的藥理基礎(chǔ)及作用得到更進(jìn)一步的明確。目前已經(jīng)確定靈芝子實(shí)體中含有9類300余種化合物，具有生理活性的成分有靈芝多糖、三萜類化合物、蛋白質(zhì)、多肽、核苷類、呋喃類、甾醇、生物堿和氨基酸等，其中以靈芝多糖、三萜化合物為主要活性成分。靈芝具有調(diào)節(jié)免疫力、抗腫瘤、保護(hù)肝臟及心血管、降血壓、鎮(zhèn)靜安眠、延緩衰老、降血糖、抗氧化等生理保健功能。鑒于靈芝具有的顯著功效，規(guī)模化人工栽培得到廣泛重視，并已形成一個(gè)重要的產(chǎn)業(yè)，目前其栽培及加工產(chǎn)業(yè)的年產(chǎn)值超過1000億元。靈芝的栽培和生產(chǎn)的發(fā)展在很大程度上必須依賴菌種，它是靈芝生產(chǎn)的前提和關(guān)鍵，我國靈芝主產(chǎn)區(qū)(山東、浙江、吉林、安徽、福建、陜西等)栽培中使用的菌種，主要為韓芝系列品種(韓國引進(jìn)種)和滬農(nóng)1號(hào)品種(本土選育品種)。

靈芝優(yōu)質(zhì)菌株HMGIM-M624從野生品種篩選馴化而來，經(jīng)試種發(fā)現(xiàn)其菌絲生物學(xué)特征和栽培農(nóng)藝性狀優(yōu)異，在常規(guī)代料栽培條件下其子實(shí)體多糖合成和積累優(yōu)勝于市場主流靈芝品種，且具有產(chǎn)孢量少、性狀穩(wěn)定遺傳等特點(diǎn)，適合工廠化規(guī)模化生產(chǎn)，避免靈芝噴孢時(shí)期產(chǎn)生大量的孢子粉對環(huán)境和機(jī)器帶來的影響，滿足靈芝產(chǎn)業(yè)化發(fā)展需求。

隨著工廠化生產(chǎn)的推廣，對栽培菌種的要求越來越高，需要更為簡便、快速、準(zhǔn)確的菌株鑒定技術(shù)以保證生產(chǎn)。目前靈芝菌種的分子標(biāo)記主要集中在應(yīng)用拮抗實(shí)驗(yàn)RFLP、RAPD(Random amplified polymorphic DNA，隨機(jī)擴(kuò)增的多態(tài)性DNA)分析、SCAR(SequenceCharacterized Amplified Region，特定序列擴(kuò)增)分析、SRAP(Sequence-relatedamplified polymorphism，相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性)分析、SSR(Simple Sequence Repeats，簡單重復(fù)序列)分析及同工酶分析技術(shù)方面。其中，RFLP需要放射性同位素的參與，技術(shù)較復(fù)雜；RAPD實(shí)驗(yàn)重復(fù)性較差，結(jié)果可靠性較低；基于PCR的簡單重復(fù)序列(SSR)標(biāo)記相對比較簡單、便宜、重復(fù)性較好，但是有些擴(kuò)增條帶不清楚且存在技術(shù)上的缺陷，如假等位基因、無效等位基因，從而導(dǎo)致SSR標(biāo)記在基因型分型和數(shù)據(jù)分析上容易產(chǎn)生錯(cuò)誤。

因此十分有必要研究新的簡單、準(zhǔn)確、高效適用于靈芝優(yōu)質(zhì)菌株HMGIM-M624菌株特異性鑒定的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有靈芝優(yōu)質(zhì)菌株HMGIM-M624菌株特異性鑒定方法的不足，提供一種靈芝優(yōu)質(zhì)菌株HMGIM-M624的分子標(biāo)記、特異性引物及鑒定方法。