[發(fā)明專利]一種基因改造的嗜蟲耶爾森氏菌工程菌及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202211154239.5
• 申請日: 2022-09-21
• 公開（公告）號: CN116004493A
• 公開（公告）日: 2023-04-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳松青;張飛萍;黃晨燕
• 申請（專利權(quán)）人: 福建農(nóng)林大學(xué)
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/31;C12N15/74;A01N63/20;A01P7/04;C12R1/01
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 林文弘;蔡學(xué)俊

本發(fā)明具體涉及一種基因改造的嗜蟲耶爾森氏菌工程菌CSLH88?pCHSW及其應(yīng)用。所述菌株分類命名為嗜蟲耶爾森氏菌工程菌Yersinia?entomophaga，已于2021年8月6日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC?NO.23127。本發(fā)明獲得的嗜蟲耶爾森氏菌工程菌CSLH88?pCHSW能夠穩(wěn)定遺傳nptII?cry3AaT?hasA外源基因且能外分泌表達(dá)Cry3AaT蛋白，且能夠?qū)崿F(xiàn)嗜蟲耶爾森氏菌CSLH88與Cry3AaT殺蟲毒素蛋白的協(xié)同增效作用，可應(yīng)用于鞘翅目害蟲的防治，具有顯著的殺蟲活性效果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基因改造的嗜蟲耶爾森氏菌工程菌CSLH88-pCHSW及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

嗜蟲耶爾森氏菌（ Yersinia?entomophaga）屬于腸桿菌科（Enterobacteriaceae）的革蘭氏陰性桿菌。該菌是一種對多種昆蟲均具有殺蟲活性的菌株，常用于害蟲生物防治中。嗜蟲耶爾森氏菌最早是從鞘翅目金龜科昆蟲中分離獲得，有相關(guān)文獻(xiàn)報道其對鞘翅目、鱗翅目、雙翅目均有殺蟲活性，主要是由于嗜蟲耶爾森氏菌能分泌一種多亞基毒素復(fù)合物（Yen-Tc），且毒素復(fù)合物（Tc）蛋白是一種具有毒力作用的毒蛋白。該Tc毒素復(fù)合物的結(jié)構(gòu)主要是由兩個較小的蛋白亞基（A1和A2）以及B和C亞基形成的復(fù)合物，該毒素復(fù)合物還攜帶Chi1和Chi2兩個幾丁質(zhì)酶。其殺蟲機(jī)理主要是通過該菌株被昆蟲取食之后，毒素復(fù)合物中含有的幾丁質(zhì)酶會將昆蟲中腸圍食膜酶解。若該菌被昆蟲取食后，進(jìn)入昆蟲血腔中，能夠?qū)е吕ハx死亡。

此外，有研究表明Bt菌株分泌的Cry毒素對天牛科幼蟲、紅棕象甲、赤擬谷盜等鞘翅目害蟲均具有一定的殺蟲活性。而嗜蟲耶爾森氏菌作為昆蟲病原菌，對鞘翅目害蟲也具有一定的殺蟲活性，若能夠?qū)烧呦嘟Y(jié)合，利用分子改造手段，構(gòu)建具有更高殺蟲毒力的嗜蟲耶爾森氏菌工程菌，則可為鞘翅目害蟲的防治提供一項新的有效選擇。本發(fā)明將嗜蟲耶爾森氏菌作為Cry3AaT毒素蛋白的載體菌株，并利用外分泌表達(dá)系統(tǒng)、接合轉(zhuǎn)移、轉(zhuǎn)座子等技術(shù)進(jìn)行高毒力工程菌株構(gòu)建，實現(xiàn)毒素基因穩(wěn)定遺傳，并將毒素從菌株胞內(nèi)分泌到胞外，有利于提高殺蟲毒素與鞘翅目害蟲接觸，獲得一種更為高效的害蟲防治方法。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種基因改造的嗜蟲耶爾森氏菌工程菌CSLH88-pCHSW及其應(yīng)用。該工程菌能夠?qū)崿F(xiàn)嗜蟲耶爾森氏菌CSLH88與Cry3AaT殺蟲毒素蛋白的協(xié)同增效，極大提高嗜蟲耶爾森氏菌對鞘翅目害蟲的殺蟲活性。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種基因改造的的嗜蟲耶爾森氏菌工程菌CSLH88-pCHSW，所述菌株分類命名為嗜蟲耶爾森氏菌工程菌 Yersinia?entomophaga，已于2021年8月6日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏編號為CGMCC?NO.23127。

上述嗜蟲耶爾森氏菌工程菌CSLH88-pCHSW能夠穩(wěn)定遺傳 nptII- cry3AaT-hasA外源基因，且能夠外分泌殺蟲毒素Cry3AaT。

上述嗜蟲耶爾森氏菌工程菌CSLH88-pCHSW是通過對嗜蟲耶爾森氏菌CSLH88的基因組進(jìn)行分子改造后獲得的。