[發(fā)明專利]溶瘤單純皰疹病毒VP5蛋白與人白細胞抗原E的互作方法及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202211149832.0
• 申請日: 2022-09-21
• 公開（公告）號: CN115808528B
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉濱磊;汪洋;周芹
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢濱會生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;C12N15/70;C12N15/65;C12N15/62;C12N15/12;C12N15/85;C12N15/38;C07K14/74;C07K14/035;C12N5/10
• 代理公司: 武漢派富知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 42305
• 代理人: 章洪

本申請公開涉及人白細胞抗原E與溶瘤單純皰疹病毒主要衣殼蛋白VP5相互作用研究，通過GST?pull?down的方法驗證UL19表達的VP5與HLA?E的互作，并對其通過質(zhì)譜鑒定、激光共聚焦、免疫共沉淀等檢測方法，驗證了溶瘤單純皰疹病毒主要衣殼蛋白VP5與HLA?E的互作，基于單純皰疹病毒主要衣殼蛋白與HLA?E的互作，提供了多種質(zhì)粒，包括HLA?E?GST、Flag?HLA?E、HA?HLA?E、Flag?UL19、HA?UL19質(zhì)粒，并進一步的利用上述質(zhì)粒和溶瘤單純皰疹病毒配合CD8supgt;+/supgt;CTL細胞和NK細胞對腫瘤細胞的細胞溶解活性。

技術(shù)領(lǐng)域

該發(fā)明專利申請涉及生物技術(shù)，具體溶瘤單純皰疹病毒VP5蛋白與人白細胞抗原E的互作方法及應(yīng)用，據(jù)此可以篩查疾病、減少腫瘤細胞、也可相應(yīng)構(gòu)建點突變動物模型用于醫(yī)學研究。

背景技術(shù)

溶瘤病毒進入靶細胞后，利用病毒的復(fù)制能力，可以破壞靶細胞。當溶瘤病毒病毒基因組傳遞到易感的靶細胞中，通過篡改細胞的生物合成機制以制造后代病毒。這些后代病毒會傳播到相鄰細胞中，從而導(dǎo)致組織被破壞的特征性模式。這會激發(fā)先天性和適應(yīng)性免疫反應(yīng)(細胞和體液)，從而抵抗感染并保護宿主免于將來再暴露于同一病毒。從一個藥理學的角度來看，病毒基因組可以看作是一類新的組織破壞性藥物，而病毒顆粒可以看作是一種納米級的核酸傳遞載體。

單純皰疹病毒是最常用的溶瘤病毒載體之一，利用其龐大的基因組可進行基因改造，從而提高它的溶瘤活性。溶瘤單純皰疹病毒(oHSV)通常是通過刪除ICP34.5來構(gòu)建的，它可以有效地傳遞各種轉(zhuǎn)基因來協(xié)助破壞腫瘤細胞。其中，I型單純皰疹病毒(HSV-1)因其選擇性裂解腫瘤細胞的能力在實驗和臨床研究中廣泛使用。

oHSV2是在單純皰疹病毒株Ⅱ型(HSV2)標準毒株HG52的基礎(chǔ)上，敲除了ICP34.5基因(infected?cell?protein?34.5)和ICP47基因(infected?cell?protein?47)，插入編碼人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(human?granulocyte?macrophage?colony?stimulatingfactor，hGM-CSF)的表達序列的新型溶瘤病毒。

對于單純皰疹病毒株Ⅱ型(HSV2)，其中敲除的ICP34.5是一種神經(jīng)毒性因子，可以抑制I型干擾素(IFN)反應(yīng)，拮抗非分裂細胞內(nèi)的PKR信號通路，ICP34.5基因的敲除提高了腫瘤細胞的選擇性，防止神經(jīng)元的感染。ICP47可以阻斷TAP(與抗原加工相關(guān)的轉(zhuǎn)運體)的功能，從而阻止了受感染細胞向CD8⁺T細胞呈遞抗原，ICP47的敲除誘導(dǎo)了US11啟動子的早期激活，增加溶瘤病毒治療活性，還使健康細胞和腫瘤細胞都呈遞病毒抗原，抑制健康組織的感染，免疫介導(dǎo)破壞腫瘤細胞，選擇性繁殖溶瘤病毒。hGM-CSF可以促進樹突狀細胞的積累和成熟，改善腫瘤抗原呈遞并刺激強大的T細胞反應(yīng)。

同時有研究表明，HSV-2的溶瘤作用可能優(yōu)于HSV-1，HSV-2的結(jié)構(gòu)域可以激活RAS/MEK/MAPK途徑并提高病毒繁殖效率。HSV-2可以選擇性感染腫瘤細胞并形成合胞體，比HSV-1產(chǎn)生更好的抗腫瘤免疫反應(yīng)。與HSV-1溶瘤病毒相比，HSV-2溶瘤病毒FusOn-H2以較低的感染復(fù)數(shù)(MOI)更有效地殺死MDA-MB-435人乳腺癌細胞，從而產(chǎn)生了更多的無腫瘤小鼠。其能釋放出更多的合胞體，從而使樹突狀細胞(DC)更有效地工作，并導(dǎo)致更強大的抗原交叉呈遞。ICP10PK缺失的oHSV-2病毒DPK通過直接溶瘤功能和誘導(dǎo)程序性細胞死亡途徑引起癌細胞死亡。oHSV2的溶瘤作用與具有相同MOI的oHSV1的溶瘤作用相同，刪除了ICP34.5和ICP47基因的新型HSV-2溶瘤病毒，在4T1模型中充分展示了治療潛力以及對免疫應(yīng)答的誘導(dǎo)作用。