[發明專利]用于診斷全結腸無神經節細胞癥的生物標志物

在審

• 申請號: 202211149234.3
• 申請日: 2022-09-21
• 公開（公告）號: CN115386629A
• 公開（公告）日: 2022-11-25
• 發明（設計）人: 陳杰;吳智浩;張嘉杰
• 申請（專利權）人: 南通書嘉醫療信息技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/113
• 代理公司: 上海霖睿專利代理事務所(普通合伙) 31391
• 代理人: 黃燕石

本發明涉及生物醫學技術領域，公開了一種用于診斷全結腸無神經節細胞癥（TCA）的生物標志物，所述生物標志物包括miR?34a?5p。本發明首次發現某些特定microRNA種類，例如miR?106b?5p、miR?205?5p、miR?375?3p和miR?34a?5p，在先天性巨結腸（HSCR）血漿外泌體中選擇性富集，其中miR?34a?5p在TCA患者的血漿外泌體中顯著升高。研究結果顯示HSCR患兒循環外泌體microRNA譜可用作TCA輔助診斷工具。

技術領域

本發明涉及生物醫學技術領域，尤其涉及一種用于輔助診斷全結腸無神經節細胞癥的外周血生物標志物。

背景技術

先天性巨結腸 (HSCR) 是一種由于腸道末端神經節細胞缺乏引起的疾病，它會導致排便延遲，如果不治療，對新生兒而言是致命的。 HSCR的全球發病頻率約為1/5000，其中男性占4:1。HSCR根據神經節組織缺失的長度分為三類：短段（S-HSCR；80%發病率）、長段（L-HSCR；15%發病率）和全結腸無神經節細胞癥（TCA；3-7 %發病率）。 TCA 是一種罕見的HSCR形式，被定義為從肛門延伸到回盲瓣近端至少 50 厘米的神經節細胞缺失。盡管它與其他形式的 HSCR 在神經節缺失方面具有相同的特征，但仍存在一些尚未解釋的差異。

無神經節細胞的腸管長度并不總是與 HSCR 癥狀密切相關，許多臨床方面仍然令人費解，診斷和治療仍然困難。嬰兒期遠端結腸缺失神經節細胞的病理特征主要通過直腸粘膜活檢來確診。然而，許多因素會影響直腸粘膜活檢，并且存在出血、腸穿孔和感染等并發癥的危險。對比灌腸和肛門直腸測壓被推薦來幫助診斷HSCR，但由于假陽性率高，不能用來排除 HSCR。因此，為 HSCR 開發合適的非侵入性診斷方法仍然是一個挑戰。

外泌體是源自體內的直徑為 30-100 nm 的膜界胞外囊泡。幾乎所有細胞類型都可以在正常和壓力條件下分泌外泌體。此外，外泌體被發現攜帶各種核酸，如 mRNAs 和非編碼 RNA，在細胞間信號轉導、免疫調節和腫瘤發生中起關鍵作用。目前，外泌體越來越多地被評估為各種疾病的診斷和預后生物標志物。并且來自血漿的外泌體內容物，例如長鏈非編碼 RNA (lncRNA) 和 microRNA，已被證明在 HSCR 中失調。

發明內容

為了應對現有技術中不足，本發明提供了一種用于輔助診斷全結腸無神經節細胞癥的外周血生物標志物，支持循環外泌體 microRNA 譜，可用作 TCA 輔助診斷工具。

本發明的技術方案是：

一種用于輔助診斷全結腸無神經節細胞癥的外周血生物標志物，其特征是，所述生物標志物包括miR-34a-5p基因。

進一步，所述生物標志物還包括miR-106b-5p、miR-205-5p、miR-375-3p基因中的一種或多種。

進一步，所述標志物基因從 TCA患兒外周血血漿外泌體中提取得到。

本發明的優點在于：

四種DEM（miR-106b-5p、miR-205-5p、miR-375-3p和miR-34a-5p）在血漿外泌體中的表達存在差異。通過qRT-PCR測定，miR-34a-5p在TCA中較其他類型HSCR大量表達，可以將microRNA (miR-34a-5p) 及其相關基因用作TCA的外周血漿生物標志物。

具體實施方式

本專利通過microRNA測序表征 HSCR 患者血漿來源外泌體中的 microRNA 含量，并利用三個常見數據庫預測靶基因。通過 KEGG 通路和相互作用網絡分析對microRNA和相關基因進行研究。由于TCA與其他形式的HSCR不同的獨特性質，隨后也將比較HSCR和TCA之間的差異表達microRNA(DEM)以確定TCA特異性改變的 microRNA。這項研究的結果進一步支持血漿來源外泌體中 microRNA 可以作為TCA的生物標志物的觀點。

具體方法包括如下步驟：