[發明專利]一種抗多種病原菌的無前導肽細菌素subticin A3及制備方法與應用

在審

• 申請號: 202211130237.2
• 申請日: 2022-09-16
• 公開（公告）號: CN115850409A
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 王海花;張曉峰;劉寧;潘春梅
• 申請（專利權）人: 河南牧業經濟學院
• 主分類號: C07K14/32
• 分類號: C07K14/32;C12P21/02;C07K1/18;C07K1/16;C07K1/14;A61K38/16;A61P31/04;A23L33/195;A23K20/147
• 代理公司: 北京盛詢知識產權代理有限公司 11901
• 代理人: 莫兆忠

本發明公開了一種抗多種病原菌的無前導肽細菌素subticin A3及制備方法與應用，屬于醫藥應用領域。所述無前導肽細菌素subticin A3的氨基酸序列為MVTFLRIVAQLGARAARWAWANKDRILGWIRDGMAIDWIINKINDMVN，氨基酸序列的第一個氨基酸為甲酰化的甲硫氨酸。所述無前導肽細菌素subticin A3的制備方法包括利用芽孢桿菌Bacillus subtilis發酵產物分離獲取，或者化學合成方法獲取。經實驗驗證，所述無前導肽細菌素subticin A3能高效殺滅豬鏈球菌等病原微生物，可用于抗菌藥物、飼料、食品等領域，具有廣闊的應用前景。

技術領域

本發明涉及醫藥應用領域領域，特別是涉及一種抗多種病原菌的無前導肽細菌素subticin A3及制備方法與應用。

背景技術

豬鏈球菌(Streptococcus suis)是一種重要的人畜共患病病原菌，可通過呼吸道、破損皮膚和消化道傳染，造成關節炎、淋巴結腫脹、敗血癥、腦膜炎及腹瀉，若人直接接觸，會使人患有腦膜炎和敗血病等；乙型溶血性鏈球菌(β-Hemolytic streptococcus)可引起皮膚、皮下組織的化膿性炎癥、呼吸道感染、流行性咽炎等人類和動物的多種疾病，嚴重威脅養殖業和人類公共安全。目前，臨床上主要采用抗生素或疫苗進行防治，因抗生素的殘留或大量抗性病原菌的產生會對人類健康造成危害，抗生素替代品的開發成為人們關注的熱點。

細菌素是細菌在代謝過程中由核糖體合成的、對產生菌具有自身免疫性的一類具有抗菌活性的多肽類物質，具有體內外抑菌活性高，對人體無毒，可選擇性強，不易產生交叉抗性，易于生物改造等特點，是抗生素的最佳替代品之一，其中無前導肽細菌素是一類由細菌核糖體合成、翻譯后不經任何修飾即對某些病原微生物有抗菌活性的多肽類物質，該類細菌素遺傳結構簡單，易在其它微生物細胞中表達，便于通過生物工程進行規模化生產，抗菌機制獨特，有巨大的商業應用潛能。因此，開發新型細菌素成為人們預防或治療由病原微生物導致疾病的重要途徑。研究表明，很多芽孢桿菌基因組中含有未被鑒定的新型細菌素基因簇，具有生物合成新型細菌素的潛能，這些新型細菌素可被鑒定、開發成抗豬鏈球菌藥物，具有重要的開發應用前景。

發明內容

本發明的目的是提供一種抗多種病原菌的無前導肽細菌素subticin A3及制備方法與應用，以解決上述現有技術存在的問題，該細菌素subticin A3對豬鏈球菌及乙型溶血性鏈球菌具有顯著的抑菌作用，在飼料、抗菌藥物、食品等領域具有廣闊的開發前景。

為實現上述目的，本發明提供了如下方案：

本發明提供一種無前導肽細菌素subticin A3，其氨基酸序列為MVTFLRIVAQLGARAARWAWANKDRILGWIRDGMAIDWIINKINDMVN，氨基酸序列的第一個氨基酸為甲酰化的甲硫氨酸。

本發明還提供無前導肽細菌素subticin A3的制備方法，包括利用枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis發酵產物分離獲取，或者化學合成方法獲取。

優選的是，所述枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的保藏編號為CGMCCNo.25552；保藏時間為2022年8月19日；保藏單位為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)；保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號。

優選的是，所述發酵產物通過將所述枯草芽孢桿菌接種于LB液體培養基中，37℃，220rpm振搖培養8h獲取；

所述發酵產物通過依次經過離子交換樹脂、高效液相色譜分離純化，得到所述細菌素subticin A3。

優選的是，所述離子交換樹脂的分離條件為：分別用蒸餾水、30％乙醇、80％乙醇洗脫，獲取活性組分；