[發(fā)明專利]一種檢測曲霉的引物探針組合、試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202211122085.1
• 申請日: 2022-09-15
• 公開（公告）號: CN115961070A
• 公開（公告）日: 2023-04-14
• 發(fā)明（設計）人: 夏江;高學娟
• 申請（專利權）人: 領航基因科技（杭州）有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11;C12R1/67;C12R1/68;C12R1/685
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 趙春華

本發(fā)明涉及生物技術領域，尤其涉及一種檢測曲霉的引物探針、試劑盒。本發(fā)明針對煙曲霉、黃曲霉、黑曲霉的線粒體基因的特定區(qū)域設計引物和探針，可快速實現(xiàn)煙曲霉、黃曲霉和黑曲霉的三種常見曲霉的聯(lián)合檢測，對已檢測的22種菌均無交叉，具有靈敏度高、特異性好、重復性高的特點。

技術領域

本發(fā)明涉及生物技術技術領域，尤其涉及一種檢測曲霉的引物探針組合、試劑盒。

背景技術

曲霉是引起感染病最多的霉菌菌種，有250多種廣布自然界，其中有40多種為致病菌。曲霉可寄生于正常人的皮膚和上呼吸道，為條件致病菌。一般正常人對曲霉菌有一定的抵抗力，不引起疾病。曲霉菌病大多為繼發(fā)性，當機體抵抗力降低時，病原菌可經皮膚黏膜損傷處或吸入呼吸道，進而進入血液循環(huán)到其他組織或器官而致病。免疫抑制、惡性腫瘤、器官移植(常見于肺移植)患者為曲霉感染的主要患者人群。曲霉的主要感染部位為肺部，肺部感染分三大類：過敏性支氣管感染、慢性感染、侵襲性感染。主要感染肺部的曲霉菌有煙曲霉、黃曲霉、黑曲霉等。煙曲霉病占所有曲霉病的90％以上。

線粒體是真核生物細胞內一個重要的細胞器，因為有氧呼吸在線粒體內進行，線粒體又被稱為真核細胞的能量供應站。作為半自主細胞器，線粒體內擁有一定量的獨立于細胞核的遺傳體系，稱為線粒體基因。

因為真菌培養(yǎng)比較困難且生長緩慢，目前檢測曲霉感染的主要方法為GM檢測，其缺點是受某些食物或藥物的影響可致假陽性結果。目前也有利用qPCR技術檢測曲霉的報道，但是其檢測靶標為煙曲霉一個菌種或煙曲霉、黃曲霉和黑曲霉三個菌種的基因組DNA(18S?RNA、ITS區(qū)或28S?RNA)，目前還沒有利選用線體基因作為檢測靶標用于檢測曲霉的報道。

發(fā)明內容

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種檢測曲霉的引物探針組合、試劑盒。該引物探針組合可快速實現(xiàn)煙曲霉、黃曲霉和黑曲霉的三種常見曲霉的聯(lián)合檢測，靈敏度高、特異性好、重復性高。

為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術方案：

一種檢測曲霉的引物探針組合，包括：

檢測煙曲霉的引物、探針：SEQ?ID?NO:1～2所示核苷酸序列的引物和SEQ?ID?NO:3所示核苷酸序列的探針；

檢測黑曲霉的引物、探針：SEQ?ID?NO:4～5所示核苷酸序列的引物和SEQ?ID?NO:6所示核苷酸序列的探針；和/或

檢測黃曲霉的引物、探針：SEQ?ID?NO:7～8所示核苷酸序列的引物和SEQ?ID?NO:9所示核苷酸序列的探針。

本發(fā)明針對煙曲霉、黃曲霉和黑曲霉的線粒體基因的特異性保守區(qū)序列設計引物和探針，其中，煙曲霉線粒體基因的特異性保守區(qū)域的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:13所示；黑曲霉線粒體基因的特異性保守區(qū)域的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:14所示；黃曲霉線粒體基因的特異性保守區(qū)域的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:15所示。

本發(fā)明中，所述探針的5’端標記有熒光報告基團，3’端標記有熒光淬滅基團。其中：

SEQ?ID?NO:3所示核苷酸序列的探針的5’端標記有熒光報告基團FAM，3’端標記有熒光淬滅基團MGB；

SEQ?ID?NO:6所示核苷酸序列的探針的5’端標記有熒光報告基團ROX，3’端標記有熒光淬滅基團MGB；

SEQ?ID?NO:9所示核苷酸序列的探針的5’端標記有熒光報告基團CY5，3’端標記有熒光淬滅基團MGB。

本發(fā)明還提供了所述的引物探針組合在制備檢測曲霉的試劑盒中的應用；所述曲霉包括煙曲霉、黃曲霉或黑曲霉中的至少一種。

本發(fā)明還提供一種檢測曲霉的試劑盒，包括所述的引物探針組合。