[發(fā)明專利]一種巨噬細(xì)胞膜包裹頭發(fā)納米顆粒的制作方法及其應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211111495.6
• 申請(qǐng)日: 2022-09-13
• 公開（公告）號(hào): CN115581684A
• 公開（公告）日: 2023-01-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林輝;張譯尹;夏啟銘;樊瀟霄;李奕暄
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K9/51
• 分類號(hào): A61K9/51;A61K47/46;A61K35/36;A61P17/02;A61P3/10;B82Y5/00;B82Y40/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 劉靜

1.一種巨噬細(xì)胞膜包裹頭發(fā)納米顆粒的制備方法，其特征在于，通過(guò)堿提取法從人體頭發(fā)中制備出頭發(fā)納米顆粒，并通過(guò)擠推法得到巨噬細(xì)胞膜，之后用超聲融合法讓巨噬細(xì)胞膜包裹頭發(fā)納米顆粒，得到一種巨噬細(xì)胞膜包裹的頭發(fā)納米顆粒。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種巨噬細(xì)胞膜包裹頭發(fā)納米顆粒的制備方法，其特征在于，以質(zhì)量比2：1的比例取頭發(fā)納米顆粒與巨噬細(xì)胞膜進(jìn)行融合，超聲水浴將頭發(fā)納米顆粒包裹入巨噬細(xì)胞膜中。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種巨噬細(xì)胞膜包裹頭發(fā)納米顆粒的制備方法，其特征在于，超聲水浴條件為220W,冰水浴20分鐘。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種巨噬細(xì)胞膜包裹頭發(fā)納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述頭發(fā)納米顆粒和巨噬細(xì)胞膜的粒徑均小于100nm。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種巨噬細(xì)胞膜包裹頭發(fā)納米顆粒的制備方法，其特征在于，頭發(fā)納米顆粒的制備過(guò)程包括：將人體頭發(fā)加入加熱后的堿性溶液中攪拌至完全溶解，再依次經(jīng)過(guò)透析、攪拌、離心、蒸干和超聲的過(guò)程后，得到所述的頭發(fā)納米顆粒。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種巨噬細(xì)胞膜包裹頭發(fā)納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述加熱后的堿性溶液溫度為80℃，堿性溶液為1M NaOH溶液，攪拌時(shí)間為5分鐘；透析條件為7000kD分子量截留，1×PBS溶液中透析24小時(shí)；攪拌條件為在磁力攪拌器中100rpm/min轉(zhuǎn)速，室溫?cái)嚢?.5小時(shí)；離心條件為2000rpm/min離心6分鐘后取上清，將上清12000rpm/min離心10分鐘后取黑色沉淀，用ddH₂O溶液清洗后再次重復(fù)12000rpm/min離心2次，每次10分鐘；超聲條件為，用520W功率的超聲探頭在冰水浴中震碎頭發(fā)微米顆粒1小時(shí)，條件為超聲開3秒，停1秒。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種巨噬細(xì)胞膜包裹頭發(fā)納米顆粒的制備方法，其特征在于，巨噬細(xì)胞膜的制備過(guò)程包括：取小鼠巨噬細(xì)胞系RAW 264.7進(jìn)行培養(yǎng)，消化下來(lái)后得到細(xì)胞沉淀；用含有1mM苯甲基磺酰氟(PMSF)的RIPA裂解液(強(qiáng))冰上裂解細(xì)胞沉淀，隨后用45W功率的超聲探頭在冰水浴中震碎溶液；之后取超聲后的溶液4℃條件下離心，取上清保存；將所取上清加入含有1mM PMSF的RIPA裂解液(強(qiáng))，送入超速離心管，超速離心后棄上清，保留沉淀，并用1×PBS吹打均勻該沉淀得到巨噬細(xì)胞膜溶液；將巨噬細(xì)胞膜溶液通過(guò)Avantis擠推器連續(xù)擠推，得到呈囊泡形態(tài)的巨噬細(xì)胞膜溶液(RAWM)，并進(jìn)行蛋白定量，明確溶液濃度。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種巨噬細(xì)胞膜包裹頭發(fā)納米顆粒的制備方法，其特征在于，用45W功率的超聲探頭在冰水浴中震碎溶液30分鐘，條件為超聲開2秒，停3秒；超聲后的離心條件為20000rpm/min離心20分鐘去除細(xì)胞核；超速離心條件為100000g/min，4℃離心45分鐘；Avantis擠推器的擠推孔徑為400nm，擠推次數(shù)為11次。

9.一種基于權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述方法制備的巨噬細(xì)胞膜包裹的頭發(fā)納米顆粒。

10.一種基于權(quán)利要求9所述巨噬細(xì)胞膜包裹的頭發(fā)納米顆粒在制備治療糖尿病足潰瘍伴感染的藥物中的應(yīng)用。