[發明專利]一種扶桑綿粉蚧表皮透射電鏡樣品制片方法

在審

• 申請號: 202211110148.1
• 申請日: 2022-09-13
• 公開（公告）號: CN115452512A
• 公開（公告）日: 2022-12-09
• 發明（設計）人: 王媛;童浩杰;蔣明星;李飛
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/30;G01N1/34;G01N1/36;G01N23/04
• 代理公司: 蘇州錦尚知識產權代理事務所(普通合伙) 32502
• 代理人: 滕錦林;翁亞娜

本發明提供了一種扶桑綿粉蚧表皮透射電鏡樣品制片方法。具體地，本發明提供了一種昆蟲表皮透射電鏡樣品的制備方法，所述方法包括如下步驟：取樣、漂洗、脫水、滲透、干燥、切片，然后將所述切片后的樣品經檸檬酸鉛溶液染色，從而得到扶桑綿粉蚧表皮透射電鏡樣品。

技術領域

本發明涉及農業科學領域，具體地，本發明提供了一種扶桑綿粉蚧表皮透射電鏡樣品制片方法。

背景技術

扶桑綿粉蚧Phenacoccus solenopsis Tinsley(半翅目粉蚧科)是一種世界性的入侵性害蟲。其對環境非生物脅迫的適應性強，可危害100多種作物與園林植物，防治困難，這與其體表有豐富蠟泌物、寄主范圍廣、繁殖能力強等特點有關。當前，防治扶桑綿粉蚧的主要方法為噴施化學農藥，即化學防治，表皮作為昆蟲與外界直接接觸的屏障，會直接影響到防治效果。

國內對棉蚧表皮結構研究較少，對于蚧類昆蟲體壁研究較多的集中在白蠟蟲Ericerus pela(半翅目蠟蚧科)中，由于其雌蟲通過表皮增厚來適應環境越冬，并具有極強的泌蠟能力而成為研究熱點。針對粉蚧類昆蟲，研究者的視線多聚焦在粉蚧類昆蟲的表皮蠟泌物上，常采用掃描電鏡的方法觀察表皮上腺體結構等。尚未有運用透射電鏡技術研究扶桑綿粉蚧表皮結構的相關研究。

昆蟲表皮由三個主要的復合層組成，即外層的外包膜(Envelope)、中間的上表皮層(Epicuticle)和內部的原表皮層(Procuticle)。外包膜由脂類和蛋白質組成，可通過共價結合形成蛋白質-醌復合物，其結構十分穩定。扶桑綿粉蚧表皮沒有明顯的角質層增厚的情況，再加上其體型較小，常規的樣品制片方法不能清晰地區分外包膜和上表皮層。

對此，本發明提出一種經檢驗能有效分辨扶桑綿粉蚧表皮外包膜結構的透射電鏡樣品制片方法，可運用推廣于粉蚧類外表皮結構研究透射電鏡樣品的制片。

發明內容

本發明的目的在于根據現有技術進行改進，提供一種扶桑綿粉蚧表皮透射電鏡樣品的制備方法及其應用。本發明的扶桑綿粉蚧表皮透射電鏡樣品的制備方法，能夠直接、客觀、準確反映和區分扶桑綿粉蚧表皮結構中的外包膜。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：提供一種扶桑綿粉蚧表皮透射電鏡樣品的制備方法，包括如下步驟：

取樣：解剖活蟲樣品的蟲體表皮并清除內容物，從而獲得蟲體表皮樣品；

漂洗：對蟲體表皮樣品進行一次或多次漂洗；

脫水：對漂洗后的樣品進行脫水處理，得到脫水后的蟲體表皮樣本；

滲透：用Spurr包埋劑與丙酮混合液處理所述的樣本后，用包埋劑滲透處理樣品；

干燥：將處理完畢后的樣品加入純Spurr包埋劑中整姿并加熱干燥；

切片：對所述的樣品進行切片；

染色：將所述切片后的樣品經檸檬酸鉛溶液染色，從而得到扶桑綿粉蚧表皮透射電鏡樣品。

在一種優選的實施方式下，所述的檸檬酸鉛溶液的濃度為0.05-0.2M。

作為本發明所述制備方法的優選實施方式，取樣步驟中，所述的解剖為活體解剖，解剖時不完全將蟲體腹面劃破，可清除組織內容物的同時，不破壞表皮的形態，可防止后續步驟表皮皺縮變形。

作為本發明所述制備方法的優選實施方式，解剖完成后，將樣品放在濾紙上使樣品干燥，后立刻放入裝有2.5％戊二醛固定液的1.5ml離心管中。

作為本發明所述制備方法的優選實施方式，樣品收集完成后，短暫離心使樣品沉淀于管底，并使樣品充分接觸固定液，小心吸取上層固定液，加入新固定液。