[發明專利]一種體外培養老齡成纖維細胞的培養體系及培養方法和應用

在審

• 申請號: 202211092124.8
• 申請日: 2022-09-08
• 公開（公告）號: CN115161264A
• 公開（公告）日: 2022-10-11
• 發明（設計）人: 牛昱宇;吳俊模;張磊
• 申請（專利權）人: 昆明理工大學
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12Q1/02;A61K35/33;A61P17/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種體外培養老齡成纖維細胞的培養體系，其特征在于，由如下組分構成：0.1-1mM甘氨酸、0.01-0.1mM膽堿、0.001-0.01mM泛酸鈣、0.001-0.01mM葉酸、0.01-0.1mM煙酰胺、0.01-0.1mM鹽酸吡哆醇、0.001-0.01mM維生素B2、0.01-0.1mM鹽酸硫胺素、0.01-0.1mM肌醇、0.1-1mM對甲苯磺酰、0.1-1mMl -胱氨酸二鹽酸、1-10mM谷氨酰胺、0.1-1mM組氨酸鹽酸鹽、0.01-10mM異亮氨酸、0.01-10mM亮氨酸、0.01-10mM鹽酸賴氨酸、0.01-10mM甲硫氨酸、0.01-10mM苯丙胺酸、0.01-10mM絲氨酸、0.01-10mM蘇氨酸、0.01-10mM左旋色氨酸、0.01-10mM絡氨酸二鈉鹽二水化合物、0.01-10mM纈氨酸、1-10mM乳化劑、0.0001-0.001mM硝酸鐵、0.1-1mM硫酸鎂、1-10mM氯化鉀、10-100mM碳酸氫鈉、10-100mM氯化鈉、0.1-1mM磷酸二氫鈉、1-100mM葡萄糖、10-100mM羥乙基哌嗪乙硫磺酸、0.01-1mM谷胱甘肽、5-20%血清。

2.根據權利要求1所述的一種體外培養老齡成纖維細胞的培養體系進行體外培養老齡成纖維細胞的培養方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）用明膠包被多個培養皿并在培養箱中放置0.5h-96h，待包被完成后，將每個培養皿內的明膠吸出，獲得多個包被后的培養皿A；

（2）將老齡成纖維細胞用胰蛋白酶消化，待老齡成纖維細胞逐漸消化為單個老齡成纖維細胞后，獲得細胞液；將所述細胞液轉入離心管中進行離心分離，待離心分離完畢，棄上清液，獲得細胞沉淀；

（3）將步驟（2）中的細胞沉淀用所述培養體系重懸，重懸結束后接種于步驟（1）中所述的一個培養皿A中，置于培養箱中培養；經培養3-4天后即可增殖出大量的老齡成纖維細胞。

3.根據權利要求2所述的體外培養老齡成纖維細胞的培養方法，其特征在于，步驟（1）中所述明膠的質量百分比為0.01-5%。

4.根據權利要求2所述的體外培養老齡成纖維細胞的培養方法，其特征在于，步驟（2）中所述離心分離的轉速為400-3000 rpm，離心分離時間為2-10min。

5.根據權利要求2所述的體外培養老齡成纖維細胞的培養方法，其特征在于，步驟（1）和步驟（3）中所述培養箱中的溫度均為37℃。

6.根據權利要求1所述的體外培養老齡成纖維細胞的培養體系或根據權利要求2-5任一項所述的體外培養老齡成纖維細胞的培養方法，在如下(a1)、(a2)至少一種中的應用：

（a1）構建藥物篩選平臺，在延緩衰老藥物中的應用；

（a2）在制備促進傷口恢復藥物中的應用。