[發(fā)明專利]一種可組裝超大片段的高效多基因組裝載體系統(tǒng)、其構(gòu)建方法及多基因組裝方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211090106.6
• 申請(qǐng)日: 2022-09-07
• 公開（公告）號(hào): CN116064626A
• 公開（公告）日: 2023-05-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 任茂智;李林宣;翟耀華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院都市農(nóng)業(yè)研究所;成都天府星際農(nóng)業(yè)科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/70
• 分類號(hào): C12N15/70;C12N15/66;C12N15/65
• 代理公司: 重慶雙馬智翔專利代理事務(wù)所(普通合伙) 50241
• 代理人: 顧曉玲

1.一種可組裝超大片段的高效多基因組裝載體系統(tǒng)，其特征在于：包括供給載體I、供給載體II和接受載體；

所述供給載體I包含順序串聯(lián)的I-SceI/Reco1/MCS/Reco3’/p1/Reco4’/Reco2/I-SceI-R核心元件DNA序列；

所述供給載體II包含順序串聯(lián)的I-SceI/Reco3/MCS/Reco1’/p2/Reco2’/Reco4/I-SceI-R核心元件DNA序列；

所述接受載體包含順序串聯(lián)的LB/p4/Reco1’/p2/ccdB/Reco2’/RB/p3核心元件DNA序列；

其中，I-SceI為歸位內(nèi)切酶I-SceI位點(diǎn)，MCS為多克隆位點(diǎn)，I-SceI-R為I-SceI的反向互補(bǔ)序列，LB為T-DNA左邊界序列，RB為T-DNA右邊界序列，ccdB為致死基因序列，p1、p2、p3為細(xì)菌抗生素選擇標(biāo)記基因，p4為植物抗生素選擇標(biāo)記基因表達(dá)盒；

Reco1、Reco2、Reco3、Reco4為BP?Clonase重組酶或者LR?Clonase重組酶識(shí)別的特異重組位點(diǎn)；Reco1或者Reco2或者Reco3或者Reco4選自attL1、attL2、attL3、attL4、attR1、attR2、attR3、attR4、attB1、attB2、attB3、attB4、attP1、attP2、attP3、attP4中的任一種，并且Reco1、Reco2、Reco3、Reco4屬于同一種酶系對(duì)應(yīng)的att位點(diǎn)，所述酶系包括BP?Clonase重組酶和LR?Clonase重組酶；Reco1、Reco2、Reco3、Reco4互不相同但均屬于attL位點(diǎn)或者attR位點(diǎn)或者attB位點(diǎn)或者attP位點(diǎn)；Reco1’為與Reco1發(fā)生不可逆重組的對(duì)應(yīng)位點(diǎn)，Reco2’為與Reco2發(fā)生不可逆重組的對(duì)應(yīng)位點(diǎn)，Reco3’為與Reco3發(fā)生不可逆重組的對(duì)應(yīng)位點(diǎn)，Reco4’為與Reco4發(fā)生不可逆重組的對(duì)應(yīng)位點(diǎn)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多基因組裝載體系統(tǒng)，其特征在于：所述Reco1、Reco2、Reco3、Reco4分別為attL1、attL2、attL3、attL4，所述Reco1’、Reco2’、Reco3’、Reco4’分別為attR1、attR2、attR3、attR4；

attL1的序列為：

5’-CAAATAATGATTTTATTTTGACTGATAGTGACCTGTTCGTTGCAACAAATTGATGAGCAATGCTTTTTTATAATGCCAACTTTGTACAAAAAAGCAGGCT-3’，

attL2的序列為：

5’-ACCCAGCTTTCTTGTACAAAGTTGGCATTATAAAAAATAATTGCTCATCAATTTGTTGCAACGAACAGGTCACTATCAGTCAAAATAAAATCATTATTTG-3’，

attL3的序列為：

5’-AAATAATGATTTTATTTTGACTGATAGTGACCTGTTCGTTGCAACAAATTGATAAGCAATGCTTTTTTATAATGCCAACTTTGTATAATAAAGTTG-3’，

attL4的序列為：

5’-CAACTTTTCTATACAAAGTTGGCATTATAAAAAAGCATTGCTTATCAATTTGTTGCAACGAACAGGTCACTATCAGTCAAAATAAAATCATTATTT-3’，

attR1的序列為：

5’-ACAAGTTTGTACAAAAAAGCTGAACGAGAAACGTAAAATGATATAAATATCAATATATTAAATTAGATTTTGCATAAAAAACAGACTACATAATACTGTAAAACACAACATATCCAGTCATATTG-3’，

attR2的序列為：

5’-CATAGTGACTGGATATGTTGTGTTTTACAGCATTATGTAGTCTGTTTTTTATGCAAAATCTAATTTAATATATTGATATTTATATCATTTTACGTTTCTCGTTCAGCTTTCTTGTACAAAGTGGT-3’，

attR3的序列為：

5’-CAACTATGTATAATAAAGTTGAACGAGAAACGTAAAATGATATAAATATCAATATATTAAATTAGATTTTGCATAAAAAACAGACTACATAATACTGTAAAACACAACATATCCAGTCACTATGG-3’，

attR4的序列為：

5’-CCATAGTGACTGGATATGTTGTGTTTTACAGTATTATGTAGTCTGTTTTTTATGCAAAATCTAATTTAATATATTGATATTTATATCATTTTACGTTTCTCGTTCAACTTTTCTATACAAAGTTG-3’。