[發明專利]負載聚多巴胺納米顆粒的細胞外囊泡及制備方法

有效

• 申請號: 202211088658.3
• 申請日: 2022-09-07
• 公開（公告）號: CN115737826B
• 公開（公告）日: 2023-06-13
• 發明（設計）人: 曹豐;張陽;劉鐘陽
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍總醫院第二醫學中心
• 主分類號: A61K47/46
• 分類號: A61K47/46;A61K9/50;A61K31/785;A61K31/4045;A61K35/15;A61P9/10;A61P29/00;A61P39/06
• 代理公司: 北京天方智力知識產權代理事務所(普通合伙) 11719
• 代理人: 路遠

本發明公開了一種負載聚多巴胺的細胞外囊泡及制備方法，該納米靶向治療平臺包括源自M2型RAW264.7巨噬細胞的細胞外囊泡和被包裹在所述細胞外囊泡內作為有效治療成分的聚多巴胺納米顆粒。本發明的納米靶向治療平臺通過使用IL?4和IL?10細胞因子處理RAW264.7巨噬細胞，使其極化為M2型巨噬細胞后，再將聚多巴胺納米顆粒與M2型巨噬細胞共孵育，并經擠壓法直接獲取負載聚多巴胺納米顆粒的細胞外囊泡。本發明可以應用在制備動脈粥樣硬化抗炎藥物或制劑中，不僅具有尺寸可控的優勢，同時在體內的滯留時間，還可使其在動脈粥樣硬化病變部位富集，具有靶向炎癥區域的能力，可以獲得良好的抗炎效果，在動脈粥樣硬化的治療中具有非常客觀的應用前景。

技術領域

本發明涉及動脈粥樣硬化治療的技術領域，具體涉及一種細胞外囊泡-聚多巴胺納米靶向治療平臺，即負載聚多巴胺納米顆粒的細胞外囊泡及制備方法。

背景技術

本發明對于背景技術的描述屬于與本發明相關的相關技術，僅僅是用于說明和便于理解本發明的發明內容，不應理解為申請人明確認為或推定申請人認為是本發明在首次提出申請的申請日的現有技術。

動脈粥樣硬化是心血管疾病的主要誘因，心血管疾病是全球發病率和死亡率的主要原因之一。炎癥不僅是動脈粥樣硬化的關鍵指標，而且還推動了整個疾病的進展。因此，抗炎被認為是治療動脈粥樣硬化的一種有前途的策略。

然而抗炎藥物缺乏針對炎癥部位的特異性靶向能力，通常半衰期較差，不僅影響其實際治療效果，而且會產生許多副作用，甚至導致死亡。而具有抗炎功效的納米材料，也因為自身的免疫原性、毒性和生物分布問題，在炎癥治療中的應用受到限制。

發明內容

本發明實施例的目的是提供一種負載聚多巴胺的細胞外囊泡及制備方法，本發明的方法納米囊泡的尺寸可控，回收率高。

本發明實施例的目的是通過如下技術方案實現的：

一種負載聚多巴胺的細胞外囊泡的制備方法，包括如下步驟：

通過使用IL-4和IL-10細胞因子處理RAW264.7巨噬細胞，使其極化為M2型巨噬細胞；

將聚多巴胺納米顆粒與M2型巨噬細胞共孵育后，獲取負載聚多巴胺納米顆粒的來源于M2型巨噬細胞的具有靶向炎癥區域的細胞外囊泡。

進一步的，所述的獲取負載聚多巴胺納米顆粒的來源于M2型巨噬細胞的具有靶向炎癥區域的細胞外囊泡通過尺寸連續擠壓法連續擠壓與聚多巴胺納米顆粒共孵育的M2型巨噬細胞獲得。

進一步的，將聚多巴胺納米顆粒負載于所述的細胞外囊泡采用的是尺寸連續擠壓法。

進一步的，所述的M2型巨噬細胞經IL-4和IL-10細胞因子處理RAW264.7巨噬細胞后獲得，以至少1×10⁷個細胞/ml的細胞數量與100ug/mL的聚多巴胺納米顆粒共同孵育在細胞培養箱中。

進一步的，所述的將聚多巴胺納米顆粒負載于所述的納米細胞外囊泡具體包括如下步驟：將聚多巴胺納米顆粒添加進M2型巨噬細胞培養體系中共孵育后，使用細胞刮刀將細胞收集，并使用微型擠壓器將細胞懸浮液依次通過1μm、400nm和200nm聚碳酸酯膜擠出，連續擠出五到六次后，使用PBS清洗并離心，以去除未被負載的聚多巴胺納米顆粒，最后獲取的即為負載聚多巴胺納米顆粒的細胞外囊泡。

一種負載聚多巴胺納米顆粒的細胞外囊泡，所述的負載聚多巴胺納米顆粒的細胞外囊泡由權利要求1-5任一項所述的制備方法制備而得。

一種負載褪黑素細胞外囊泡，所述的負載褪黑素細胞外囊泡由上述的制備方法制備而得。

本發明實施例具有如下有益效果：