[發明專利]一種鑒別當歸及人參健脾丸中是否混有歐當歸的特異性引物、探針和方法在審
| 申請號： | 202211087520.1 | 申請日： | 2022-09-07 |
| 公開（公告）號： | CN115896325A | 公開（公告）日： | 2023-04-04 |
| 發明（設計）人： | 欒永福;林永強;解盈盈;汪冰;周廣濤;周倩倩;穆向榮 | 申請（專利權）人： | 山東省食品藥品檢驗研究院 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京元本知識產權代理事務所(普通合伙) 11308 | 代理人： | 徐蘋 |
| 地址： | 250101 山東*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 鑒別 當歸 人參 健脾丸中 是否 混有歐 特異性 引物 探針 方法 | ||
1.一種鑒別當歸及人參健脾丸中是否混有歐當歸的特異性引物，其特征在于，所述特異性引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物的核苷酸序列為5'-CATCCCGTTAGTGGGTAGC-3'，所述下游引物的核苷酸序列為5'-CCTAGTGGCTTCGGGCG-3'。
2.一種鑒別當歸及人參健脾丸中是否混有歐當歸的探針，其特征在于，所述探針5'端標記熒光素基團FAM，3'端標記淬滅基團BHQ1，所述探針的核苷酸序列為FAM-TAGCGGCGTCATTCCAAAATACAAC-BHQ1'。
3.一種鑒別當歸及人參健脾丸中是否混有歐當歸的方法，其特征在于，所述方法利用權利要求1所述的特異性引物和權利要求2所述的探針進行當歸和歐當歸的鑒別。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法包括：
結合權利要求1所述的特異性引物和權利要求2所述的探針進行實時熒光PCR反應，檢測或輔助檢測待測樣品中是否含有或候選含有歐當歸；
結合權利要求1所述的特異性引物和權利要求2所述的探針進行實時熒光PCR反應，檢測或輔助檢測待測樣品是否為或候選為歐當歸。
5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法的主要步驟包括：
(1)提取待測樣品的總DNA；
(2)以提取的DNA為模板，配制PCR反應體系，所述PCR反應體系中包括權利要求1所述的上游引物、下游引物和權利要求2所述的探針，設置反應條件，將PCR反應體系置于熒光定量PCR儀中進行反應；
(3)根據反應結果進行特異性鑒別。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述PCR反應體系為：總體積為20μl，分別加入熒光PCR反應混合液(2×)10μl，權利要求2所述的探針(2μmol/L)1μl，權利要求1所述的上下游引物(5μmol/L)各1μL，模板DNA溶液0.5μl，滅菌超純水6.5μl。
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述PCR反應條件為：將反應體系置于熒光定量PCR儀中進行反應，設定如下參數：階段1：95℃，3分鐘；階段2：95℃，10秒，65℃，32秒，35個循環。
8.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟(3)所述根據反應結果進行特異性鑒別，以是否產生S型熒光擴增曲線為判定依據；
人參健脾丸陽性樣品：按處方量及工藝用同等比例的歐當歸藥味代替當歸藥味；
結果判定包括：
(1)無熒光對數增長，或有熒光對數增長但相應的CT值＞30.0，視為未檢出歐當歸；
(2)有熒光對數增長，且相應的CT值＜30.0，視為檢出歐當歸。
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