[發明專利]抗豬δ冠狀病毒NS7和NS7a蛋白的雜交瘤細胞株、單克隆抗體及其應用

有效

• 申請號: 202211086715.4
• 申請日: 2022-09-06
• 公開（公告）號: CN116042531B
• 公開（公告）日: 2023-10-24
• 發明（設計）人: 牟春曉;謝思漢;陳振海
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C12N15/13;C07K16/10;G01N33/569;G01N33/577
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王艷

本發明公開了一種抗豬δ冠狀病毒NS7和NS7a蛋白雜交瘤細胞株，所述雜交瘤細胞株命名為雜交瘤細胞株PDCoV?NS7?08A，保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏地址為中國武漢·武漢大學，保藏日期為2022年8月18日，保藏編號為CCTCC?NO:C2022271。本發明所涉及的雜交瘤細胞具有穩定的抗體分泌能力，所分泌的單克隆抗體與豬δ冠狀病毒NS7和NS7a蛋白具有良好的反應特異性，其識別的抗原表位在豬δ冠狀病毒NS7蛋白第111~117位氨基酸，其多肽序列為supgt;111/supgt;PSTLEEDsupgt;117/supgt;，該表位尚未見報道。本發明為以后進行豬δ冠狀病毒病原學及其致病機理的研究奠定了良好的物質基礎。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及抗豬δ冠狀病毒NS7和NS7a蛋白的雜交瘤細胞株、單克隆抗體及其應用。

背景技術

豬δ冠狀病毒(Porcine?deltacoronavirus，PDCoV)是一種新發的豬冠狀病毒主要對新生仔豬有重要威脅，感染的新生仔豬具有較高的死亡率，臨床癥狀與豬流行性腹瀉病毒(PEDV)、傳染性胃腸炎病毒(TGEV)相似，主要表現為嘔吐、急性水樣腹瀉、脫水甚至死亡。生長豬、成年豬及生產母豬發病輕微，可不治而愈。近年來全球各地養豬地區均報道了該病的發生，給全球養豬業造成了巨大的經濟損失。2021年有報道稱研究人員在三名患有急性發熱疾病的海地兒童血漿樣本中檢測到了PDCoV，這提示了PDCoV有跨種傳播感染人類的風險，因此我們必須對此病毒加以重視。

豬德爾塔冠狀病毒(PDCoV)屬于δ冠狀病毒是一種新發現的豬腸道致病性冠狀病毒，目前也是δ冠狀病毒屬的唯一成員。其全長基因組大小約為25.4kb，也是冠狀病毒基因組中最小的冠狀病毒。其基因組包括非編碼區與編碼區，其中非編碼區為基因組的5端與3端的5～UTR、3～UTR，以及5末端與3末端的一個帽子結構和一個poly(A)結構。這些區域雖然不編碼蛋白，但是對于該病毒的復制與轉錄具有重要的調控作用。病毒編碼區為開放閱讀框(open?reading?frame)ORF1a和ORF1b、棘突蛋白S、包膜蛋白E、膜蛋白M、輔助蛋白NS6、核衣殼蛋白N、以及位于N蛋白內部的兩個輔助蛋白NS7和NS7a。PDCoV編碼的三種輔助蛋白(NS6、NS7、NS7a)不參與病毒粒子的組成但是在病毒復制過程中承擔著重要角色。NS7蛋白位于PDCoV?N蛋白的內部，兩者具有不同的氨基酸序列，在NS7蛋白的內部還有一個輔助蛋白NS7a，目前已知NS7a具有拮抗I型干擾素產生的功能，但是對于NS7蛋白功能的報道甚少。

單克隆抗體是由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。通過單克隆抗體技術來獲取雜交瘤細胞株，該技術已經應用到了獸醫領域多個動物病毒的研究之中，如非洲豬瘟病毒、口蹄疫病毒、流感病毒等。因此為了進一步研究NS7與NS7a蛋白的功能，以及兩者之間的關系，我們有必要制備特異性強的單克隆抗體。

發明內容

發明目的：本發明所要解決的技術問題是提供了一種抗豬δ冠狀病毒NS7和NS7a蛋白雜交瘤細胞株。

本發明還要解決的技術問題是提供了一種單克隆抗體，所述單克隆抗體由所述的雜交瘤細胞株分泌產生。

本發明還要解決的技術問題是提供了一種核酸分子，其編碼所述的單克隆抗體。

本發明還要解決的技術問題是提供了所述的單克隆抗體、所述的核酸分子在制備檢測或診斷豬δ冠狀病毒的試劑、試紙條或試劑盒中的應用。

本發明最后要解決的技術問題是提供了一種豬δ冠狀病毒的檢測試劑盒。

技術方案：為了解決上述技術問題，本發明提供了一種抗豬δ冠狀病毒NS7和NS7a蛋白雜交瘤細胞株，所述雜交瘤細胞株命名為雜交瘤細胞株PDCoV-NS7-08A，保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏地址為中國武漢·武漢大學，保藏日期為2022年8月18日，保藏編號為CCTCC?NO：C2022271。