[發明專利]用于微流控熒光免疫檢測的組合物、芯片及其制備方法

在審

• 申請號: 202211078418.5
• 申請日: 2022-09-05
• 公開（公告）號: CN115327103A
• 公開（公告）日: 2022-11-11
• 發明（設計）人: 鐘越;蘭華林;何樂春;任江濤;楊燕斌;趙朝輝;唐海燕
• 申請（專利權）人: 重慶創芯生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N33/545;G01N33/558;G01N33/68
• 代理公司: 重慶市前沿專利事務所(普通合伙) 50211
• 代理人: 廖巧玫;肖秉城

本發明公開了一種用于微流控熒光免疫檢測的組合物，包含質量濃度百分比為0.5％～5％的牛血清白蛋白、0.2％～5％的聚乙烯吡咯烷酮、0.5％～12％的糖類、0.05％～0.5％的吐溫20以及緩沖液。本發明的組合物可使得熒光抗體在進行熒光免疫檢測時，均勻充分地釋放，同時避免熒光抗體的團聚。由于其制備過程簡單，原料來源簡單，便于在免疫診斷中廣泛地應用。采用本發明組合物所制備的檢測芯片，其反應區熒光抗體形狀規整，芯片間差異小，同時可大幅度降低熒光抗體殘留率。

技術領域

本發明涉及一種用于微流控熒光免疫檢測的組合物、芯片及其制備方法，屬于微流控熒光免疫檢測技術領域。

背景技術

免疫診斷是應用免疫學的理論、技術和方法診斷疾病和測定免疫狀態，是確定疾病的病因和病變部位，機體免疫狀態是否正常的重要方法。免疫診斷廣泛應用于醫院、血站、體檢中心，主要用于心肌疾病、腫瘤、傳染病等檢測，在現代醫學領域發揮越來越大的作用。微流控熒光免疫檢測技術是一種新型的快速診斷技術，其原理是將特異性的抗原或者抗體先固定于微流控通道中，將特異性抗體與熒光物質連接的復合物干燥于反應區，再配備濾血膜以及上蓋，焊接制備成微流控檢測芯片，后續檢測時，樣本流經反應區將熒光抗體沖刷下來，流至微流控通道中的包被位點進行特異性反應，最后通過測定包被位點的熒光強度并通過線性曲線，計算出待測物質的濃度，從而實現疾病的快速診斷。制作微流控熒光免疫檢測芯片時，需要將熒光抗體干燥固定于微流控芯片反應區固相表面，在后續使用時，隨著樣本或者緩沖液流過，熒光抗體釋放出來，以此來檢測對應抗原。若熒光抗體直接與微流控芯片固相表面直接接觸，由于微流控芯片一般是大分子有機物制成，會吸附蛋白物質，且在靜電吸附、疏水作用力的作用下，熒光抗體很容易大量吸附在微流控芯片固相表面上，樣本難以將其帶入檢測位點，進行免疫識別反應，從而影響檢測結果的準確性；后續使用時，還容易引起熒光抗體現釋放不充分、不均勻，使檢測位點出現熒光不均勻等問題，影響檢測結果；同時還會引起熒光抗體團聚等問題。這些問題，也是一直困擾微流控熒光免疫檢測產品開發的技術難題。

發明內容

本發明是提供一種用于微流控熒光免疫檢測的組合物，可使得熒光抗體在進行熒光免疫檢測時，均勻充分地釋放，同時避免熒光抗體的團聚。

為達到上述目的，本發明所采用的技術方案是：一種用于微流控熒光免疫檢測的組合物，包含質量濃度百分比為0.5％～5％的牛血清白蛋白、0.2％～5％的聚乙烯吡咯烷酮、0.5％～12％的糖類、0.05％～0.5％的吐溫20以及緩沖液。

優選地，所述糖類為濃度百分比為0.5％～6％蔗糖和0.5％～6％海藻糖的混合溶液。

優選地，包含質量濃度百分比為1％的牛血清白蛋白、1％的聚乙烯吡咯烷酮、0.5％的蔗糖、2％的海藻糖和0.05％的吐溫20。

優選地，所述緩沖液包括Tris-HCl緩沖液或TAPS緩沖液，濃度為20～50mM。

一種用于微流控熒光免疫檢測的組合物的制備方法，包括以下步驟：步驟一，按照權利要求1中所述質量濃度百分比，稱取對應重量的牛血清白蛋白、聚乙烯吡咯烷酮和糖類加入緩沖液后溶解；步驟二，稱取吐溫20加入至步驟一的溶液后，再次攪拌溶解。

一種用于微流控熒光免疫檢測的芯片，包含上述的組合物。

一種用于微流控熒光免疫檢測的芯片的制備方法，包括以下步驟：將上述制備好的組合物加入芯片的反應區；待所述組合物干燥后，再將熒光抗體添加至已干燥的組合物上。

優選地，每片芯片上所述組合物的使用量為0.5μL～5μL。

優選地，采用點樣儀將制備好的組合物加入芯片的反應區；采用點樣儀/移液器將熒光抗體添加至已干燥的組合物上。

優選地，所述組合物的干燥方法包括晾干、烘干、風干或凍干，其中，烘干溫度可為37℃，自然晾干、風干的時間為15min～30min。根據糖含量不同晾干時間不同，糖含量越高晾干時間越長。