[發(fā)明專利]雜交瘤細(xì)胞株BBBE1H1、其產(chǎn)生的抗苯并[a]芘單克隆抗體及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211073958.4
• 申請(qǐng)日: 2022-09-02
• 公開（公告）號(hào): CN115960840A
• 公開（公告）日: 2023-04-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 唐曉倩;李培武;張奇;姜俊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所
• 主分類號(hào): C12N5/20
• 分類號(hào): C12N5/20;C07K16/44;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/531;B01J20/286;B01J20/30
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 喬宇

本發(fā)明涉及雜交瘤細(xì)胞株BBBE1H1、其產(chǎn)生的抗苯并[a]芘單克隆抗體及應(yīng)用。本發(fā)明提供的雜交瘤細(xì)胞株BBBE1H1可以用于制備高效價(jià)抗苯并[a]芘單克隆抗體，酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)法測(cè)得的效價(jià)可達(dá)1.2×10⁵。本發(fā)明提供的抗苯并[a]芘單克隆抗體靈敏度高、特異性好，對(duì)苯并[a]芘的50％抑制濃度IC₅₀為0.013ng/mL。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及雜交瘤細(xì)胞株BBBE1H1及其產(chǎn)生的抗苯并[a]芘單克隆抗體。

背景技術(shù)

苯并[a]芘(benzopyrene,BaP)又名3,4－苯并芘，是一種含苯環(huán)的稠環(huán)芳烴。常溫下狀態(tài)為性質(zhì)穩(wěn)定的黃色粉末，有強(qiáng)烈的致癌作用，可以誘發(fā)肺癌、呼吸道癌、胃癌、消化道癌、膀胱癌和皮膚癌。苯并[a]芘還具有致畸性和致突變性，它能通過母體經(jīng)胎盤影響子代，從而引起胚胎畸形或死亡以及幼仔免疫功能下降等。食物中苯并[a]芘來源主要有兩個(gè)方面:一是不完全燃燒產(chǎn)生的廢氣通過水源、大氣和土壤進(jìn)入到蔬菜、水果、糧食、水產(chǎn)品等食物中；二是在熏制、烘烤和煎炸過程中發(fā)生焦糊現(xiàn)象時(shí)，苯并芘含量比普通食物增加10～20倍。因此苯并[a]芘污染是威脅農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全及農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重大風(fēng)險(xiǎn)隱患，我國(guó)已對(duì)食品中的苯并[a]芘做了限量規(guī)定。

現(xiàn)有苯并[a]芘的檢測(cè)方法主要是基于大型儀器的實(shí)驗(yàn)室確證性檢測(cè)技術(shù)。免疫學(xué)檢測(cè)法是基于抗原-抗體特異性識(shí)別，通過酶、熒光等標(biāo)記技術(shù)將免疫信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)榭蓹z測(cè)信號(hào)，從而定性或定量顯示靶標(biāo)物的含量。此類方法具有樣品處理簡(jiǎn)單、靈敏度高、特異性強(qiáng)、實(shí)驗(yàn)周期短等優(yōu)點(diǎn)，其中抗體的靈敏度與特異性直接決定免疫檢測(cè)法準(zhǔn)確與否的關(guān)鍵。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供雜交瘤細(xì)胞株BBBE1H1、其產(chǎn)生的抗苯并[a]芘(benzopyrene,BaP)單克隆抗體及其應(yīng)用。

本發(fā)明提供了一種特異性結(jié)合苯并[a]芘單克隆抗體的可變區(qū)序列，其中所述特異性結(jié)合苯并[a]芘單克隆抗體的重鏈可變區(qū)為序列表中SEQ?ID?NO:3所示的氨基酸序列或其經(jīng)過一個(gè)或多個(gè)氨基酸添加、刪除、替換或修飾保守性突變獲得的保守性突變體；輕鏈可變區(qū)為序列表中SEQ?ID?NO:4所示的氨基酸序列或其經(jīng)過一個(gè)或多個(gè)氨基酸添加、刪除、替換或修飾保守性突變獲得的保守性突變體。本發(fā)明提供的單克隆抗體的可變區(qū)序列能特異性結(jié)合苯并[a]芘。

本發(fā)明還提供上述特異性結(jié)合苯并[a]芘單克隆抗體的可變區(qū)序列的編碼基因序列。

優(yōu)選地，作為本發(fā)明的一種實(shí)施方式，所述特異性結(jié)合苯并[a]芘的單克隆抗體的抗體為雜交瘤細(xì)胞株BBBE1H1分泌產(chǎn)生的抗苯并[a]芘單克隆抗體。

提供雜交瘤細(xì)胞株，雜交瘤細(xì)胞株BBBE1H1于2018年4月3日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是，中國(guó)，武漢，武漢大學(xué)，保藏編號(hào)為CCTCC?NO:C201882。其具有序列表中SEQ?ID?NO:1所示的抗苯并[a]芘單克隆抗體重鏈可變區(qū)編碼基因序列和序列表中SEQ?ID?NO:2所示的抗苯并[a]芘單克隆抗體輕鏈可變區(qū)編碼基因序列。

抗苯并[a]芘單克隆抗體，它由保藏編號(hào)為CCTCC?NO:C201882的雜交瘤細(xì)胞株BBBE1H1分泌產(chǎn)生。其重鏈可變區(qū)具有序列表中SEQ?ID?NO:3所示的氨基酸序列；輕鏈可變區(qū)具有序列表中SEQ?ID?NO:4所示的氨基酸序列。

本發(fā)明提供的抗苯并[a]芘單克隆抗體靈敏度高，同時(shí)特異性高。其對(duì)苯并[a]芘(BaP)的50％抑制濃度，IC₅₀為0.013ng/mL；與苯并[a]蒽、苯并[b]熒蒽、苯并[e]芘、苯并[ghi]苝、苯并[j]熒蒽、苯并[k]熒蒽、屈、熒蒽、芘的交叉反應(yīng)均小于15％。

抗苯并[a]芘單克隆抗體在制備免疫檢測(cè)苯并[a]芘產(chǎn)品或苯并[a]芘親和柱中的應(yīng)用。