[發明專利]一種溶劑耐受性提高的環糊精葡萄糖基轉移酶及其制備

在審

• 申請號: 202211071304.8
• 申請日: 2022-09-01
• 公開（公告）號: CN116144622A
• 公開（公告）日: 2023-05-23
• 發明（設計）人: 韓瑞枝;姜鈺琳;樊朝悅;倪曄
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;C12P19/60
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 趙巧娜

1.一種環糊精葡萄糖基轉移酶突變體，其特征在于，所述突變體是將氨基酸序列如SEQID?NO.1所示的環糊精葡萄糖基轉移酶的第539位的甘氨酸突變為異亮氨酸得到的；

或將氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示的環糊精葡萄糖基轉移酶的第539位的甘氨酸突變為異亮氨酸，同時將第146位的精氨酸突變為苯丙氨酸得到的；

或將氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示的環糊精葡萄糖基轉移酶的第539位的甘氨酸突變為異亮氨酸；同時將第146位的精氨酸突變為苯丙氨酸；同時將第147位的天冬氨酸突變為天冬酰胺得到的。

2.編碼權利要求1所述突變體的基因。

3.攜帶權利要求2所述基因的重組載體。

4.如權利要求3所述的重組載體，其特征在于，以pET系列載體、pUT系列載體或pBAD系列載體為表達載體。

5.表達權利要求1所述突變體，或攜帶權利要求2所述基因，或攜帶權利要求3或4所述重組載體的重組細胞。

6.如權利要求5所述的重組細胞，其特征在于，所述重組細胞以細菌或真菌為宿主細胞。

7.一種提高環糊精葡萄糖基轉移酶對有機溶劑的耐受性的方法，其特征在于，所述方法為，將氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示的環糊精葡萄糖基轉移酶的第539位的甘氨酸突變為異亮氨酸；

或將氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示的環糊精葡萄糖基轉移酶的第539位的甘氨酸突變為異亮氨酸，同時將第146位的精氨酸突變為苯丙氨酸；

或將氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示的環糊精葡萄糖基轉移酶的第539位的甘氨酸突變為異亮氨酸；同時將第146位的精氨酸突變為苯丙氨酸；同時將第147位的天冬氨酸突變為天冬酰胺。

8.如權利要求7所述的方法，其特征在于，所述有機溶劑包括二甲基亞砜(DMSO)、乙醇、甲醇及丙酮中的一種或多種。

9.一種生產長鏈糖基化染料木素的方法，其特征在于，所述方法為，向含有可溶性淀粉和染料木素的反應體系中加入權利要求1所述的環糊精葡萄糖基轉移酶突變體進行反應，得到反應液；將反應液進行分離，獲得長鏈糖基化染料木素。

10.權利要求1所述的突變體，或權利要求2所述的基因，或權利要求3或4所述的重組載體，或權利要求5或6所述的重組細胞，在天然疏水性底物的糖基化應用，或在有機溶劑反應體系中的糖基化應用。