[發(fā)明專利]一種豬乙型腦炎滅活疫苗及其制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211065797.4
• 申請(qǐng)日: 2022-09-01
• 公開（公告）號(hào): CN116139261A
• 公開（公告）日: 2023-05-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邵攀峰;王家福;尹忠良;康斌;李建林;寶魯?shù)?/a>;董鵬;孫慶霞;李少麗;朱國坡
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州佑本動(dòng)物疫苗有限公司;金河佑本生物制品有限公司
• 主分類號(hào): A61K39/12
• 分類號(hào): A61K39/12;A61K39/39;A61K47/20;A61P31/14
• 代理公司: 麗水布銳芝專利代理事務(wù)所(普通合伙) 33435
• 代理人: 程志軍

本發(fā)明提供了一種豬乙型腦炎滅活疫苗及其制備方法，滅活的豬乙型腦炎滅活病毒為豬乙型腦炎病毒JEV(A6株)其保藏編號(hào)為CCTCC?NO:V202268。其中一種豬乙型腦炎滅活疫苗制備方法包括以下步驟：培養(yǎng)VERO細(xì)胞，接種JEV(A6株)毒種，收集病毒培養(yǎng)液，過濾濃縮、滅活并純化，純化后的病毒液與ISA206VG佐劑，按照水相與油相質(zhì)量比1:1充分?jǐn)嚢杌靹颍瞥韶i乙型腦病毒滅活疫苗(A6株)，利用生物反應(yīng)器微載體懸浮培養(yǎng)Vero細(xì)胞技術(shù)，有利于病毒液的大規(guī)模制備，能夠顯著提高生產(chǎn)效率，保證疫苗質(zhì)量穩(wěn)定、可靠。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物制藥領(lǐng)域，具體涉及一種豬乙型腦炎滅活疫苗及其制備方法。

背景技術(shù)

豬乙型腦炎(Japanese?encephalitis,JE)是由黃病毒科(Flaviridae)黃病毒屬(Flavi.vi.rus)乙型腦炎病毒(Japanese?encephalitis?virus,JEV)引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染急性、發(fā)熱性人畜共患傳染病。該病在不同的地域季節(jié)性發(fā)病差異顯著，在熱帶地區(qū)沒有明顯的季節(jié)性，而在溫帶和亞熱帶地區(qū)發(fā)病則有嚴(yán)格的季節(jié)性。豬乙型腦炎是由庫蚊為傳播媒介引起的一種傳染病，各種日齡、品種、性別的豬在受到攜帶乙型腦炎病毒的蚊蟲叮咬后均可能感染發(fā)病，但一般對(duì)豬的致死率不高。由于豬的飼養(yǎng)量大且每年因大量屠宰致使豬群更新快，新出生的豬均無免疫力且易感，經(jīng)過一個(gè)乙腦流行季節(jié)后，幾乎100％的幼豬均受到蚊蟲叮咬而感染，從而成為新的傳染源。病毒通常在蚊-豬-蚊等動(dòng)物間循環(huán)，豬被認(rèn)為是JEV最重要的自然增殖動(dòng)物。豬還是JEV的重要貯存宿主和傳染源，人的感染大多是豬群感染JEV經(jīng)蚊傳播而引致的，通常可形成“豬一蚊一人”的循環(huán)傳播模式，人感染后(尤其是兒童)可引發(fā)嚴(yán)重的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病甚至是急性致死腦炎，死亡率可達(dá)25％。我國對(duì)JEV的研究大多集中在人源和蚊源株，對(duì)豬源JEV的報(bào)道較少。

目前國內(nèi)養(yǎng)豬場(chǎng)主要使用的是豬乙型腦炎活疫苗(SA14-14-2株)，該疫苗是我國學(xué)者俞永新等將乙型腦炎病毒(SA-14株)強(qiáng)毒在原代細(xì)胞(地鼠腎細(xì)胞)長(zhǎng)期傳代篩選出的有良好免疫原性的弱毒株，該減毒活疫苗生產(chǎn)成本低，可誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫，免疫效果好。但是減毒活疫苗的毒力返強(qiáng)、基因重組等問題，仍是需要引起關(guān)注。同時(shí)需要特別注意的是，目前我國人用乙型腦炎活疫苗使用的也是乙型腦炎病毒(SA14-14-2株)，由于豬是JEV擴(kuò)增傳播宿主，對(duì)養(yǎng)豬場(chǎng)長(zhǎng)期、大規(guī)模使用豬乙型腦炎活疫苗(SA14-14-2株)接種，可能會(huì)對(duì)乙型腦炎病毒流行株形成免疫壓力，進(jìn)而導(dǎo)致毒株變異，存在的生物安全風(fēng)險(xiǎn)值得思考。因此，開發(fā)新的豬用JEV疫苗，特別是安全、高效的滅活疫苗具有重要意義，不僅有利于豬傳染病防控，而且對(duì)人類乙型腦炎病的防控也具有十分重要的公共衛(wèi)生意義。

隨著當(dāng)前傳代細(xì)胞和生物反應(yīng)器用作疫苗生產(chǎn)介質(zhì)技術(shù)被廣泛應(yīng)用，采用傳代細(xì)胞(如Vero、BHK-21等)培養(yǎng)JEV疫苗成為研究趨勢(shì)，人用傳代細(xì)胞乙型腦炎滅活疫苗已商品化且被廣泛推廣應(yīng)用。目前，采用生物反應(yīng)器技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞和病毒的培養(yǎng)已經(jīng)成為國際上病毒疫苗研發(fā)的熱點(diǎn)，法國巴斯德研究所應(yīng)用500L生物反應(yīng)器已經(jīng)成功地工業(yè)化生產(chǎn)出Vero細(xì)胞狂犬疫苗和小兒麻痹疫苗，取得了顯著的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。因此，對(duì)利用生物反應(yīng)器生產(chǎn)乙腦疫苗的工藝進(jìn)行深入的研究，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)具有廣闊的前景和積極的意義。

在現(xiàn)有技術(shù)中，有一種種豬流行性乙型腦炎滅活疫苗制備方法公布號(hào)CN104208668A，該方法通過中國倉鼠肺細(xì)胞培養(yǎng)病毒制備疫苗，雖然利用倉鼠肺細(xì)胞系繁殖豬流行性乙型腦炎病毒，病毒適應(yīng)性好，但該方法不利于病毒液的大規(guī)模制備，生產(chǎn)效率還有待提高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的技術(shù)缺陷，提供一種豬乙型腦炎滅活疫苗及其制備方法，以實(shí)現(xiàn)利用Vero細(xì)胞擴(kuò)繁JEV(A6株)，顯著提高生產(chǎn)效率，保證疫苗質(zhì)量穩(wěn)定、可靠。