[發(fā)明專利]一種用于病原菌快速檢測的滑動微流控芯片有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202211064371.7 | 申請日： | 2022-09-01 |
| 公開（公告）號： | CN115430469B | 公開（公告）日： | 2023-08-04 |
| 發(fā)明（設計）人： | 馮世倫;蔡杲哲;趙建龍 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國科學院上海微系統(tǒng)與信息技術研究所 |
| 主分類號： | B01L3/00 | 分類號： | B01L3/00;C12M1/34;C12M1/00;C12Q1/06;C12Q1/10;C12Q1/34 |
| 代理公司： | 上海泰博知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31451 | 代理人： | 魏峯 |
| 地址： | 200050 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 用于 病原菌 快速 檢測 滑動 微流控 芯片 | ||
1.一種用于病原菌快速檢測的滑動微流控芯片，其特征在于，所述滑動微流控芯片從上而下分別為上層帶通道的PDMS（6）、下層帶通道的PDMS（7）、基底（8），所述下層帶通道的PDMS（7）和所述基底（8）連接，所述上層帶通道的PDMS（6）和下層帶通道的PDMS（7）拼合滑動，所述上層帶通道的PDMS（6）包括若干第一圓腔室（1）和若干第一直通道（10），單個第一圓腔室（1）和單個第一直通道（10）各自以陣列形式布置在上層帶通道的PDMS（6），所述第一圓腔室（1）的列與所述第一直通道（10）的列交錯排布，所述下層帶通道的PDMS（7）包括若干第二圓腔室（2）和若干第二直通道（9），單個第二圓腔室（2）和單個第二直通道（9）各自以陣列形式布置在下層帶通道的PDMS（7），所述第二圓腔室（2）的列與所述第二直通道（9）的列交錯排布，所述第一圓腔室（1）之間通過第二直通道（9）連接，所述第二圓腔室（2）之間通過第一直通道（10）連接，通過滑動上層帶通道的PDMS（6）使得所述第一圓腔室（1）與所述第二直通道（9）連接或分開、所述第二圓腔室（2）與所述第一直通道（10）連接或分開、所述第一圓腔室（1）和所述第二圓腔室（2）閉合或分開。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的滑動微流控芯片，其特征在于，所述上層帶通道的PDMS（6）和所述下層帶通道的PDMS（7）拼合滑動是通過硅油實現(xiàn)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的滑動微流控芯片，其特征在于，所述下層帶通道的PDMS（7）和所述基底（8）連接是通過等離子體鍵合實現(xiàn)；基底（8）為玻璃基底。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的滑動微流控芯片，其特征在于，所述第一圓腔室（1）的每個列中第一個圓腔室和最后一個圓腔室分別設有進樣口、出樣口；所述第二圓腔室（2）的每個列中第一個圓腔室和最后一個圓腔室分別設有進樣口、出樣口。
5.一種如權(quán)利要求1所述滑動微流控芯片的制備方法，包括：
在單晶玻璃片中央滴加硅油，進行旋轉(zhuǎn)勻膠，將上層帶通道的PDMS（6）面朝下放置于旋涂有硅油的單晶玻璃片上，靜置，取下上層帶通道的PDMS（6）并與帶有基底（8）的下層帶通道的PDMS（7）接觸，得到滑動微流控芯片。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述硅油黏度為5000-10000cst；旋涂轉(zhuǎn)速為2000-4000rpm；靜置時間為2-10min。
7.一種如權(quán)利要求1所述的滑動微流控芯片檢測病原菌的方法，包括：
將第一圓腔室（1）和第二圓腔室（2）分開并與第二直通道（9）進行連接，將第二圓腔室（2）與第一直通道（10）連接，將病原菌、Luria-Bertani肉湯和酶誘導劑混合，通過第二直通道（9）裝入上層帶通道的PDMS（6）的第一圓腔室（1）中，將包含裂解緩沖液和酶底物的溶液通過第一直通道（10）裝入下層帶通道的PDMS（7）的第二圓腔室（2）中，滑動上層帶通道的PDMS（6）使得第一圓腔室（1）與第二直通道（9）分開、第二圓腔室（2）與第一直通道（10）分開，同時第一圓腔室（1）和第二圓腔室（2）分開，隨后，病原菌在含有肉湯的第一圓腔室（1）培養(yǎng)生長，并在酶誘導劑的作用下在細胞質(zhì)中表達特異性酶，然后滑動上層帶通道的PDMS（6）使得第一圓腔室（1）和第二圓腔室（2）對齊形成合并的腔室（5），第二圓腔室（2）中的裂解緩沖液將裂解病原菌，釋放特異性酶，使其催化酶底物反應產(chǎn)生熒光，再測量合并的腔室（5）的熒光信號，實現(xiàn)病原菌的定量分析。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述病原菌為大腸桿菌；所述特異性酶為β-葡萄糖醛酸酶。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述Luria-Bertani肉湯工作濃度為1%-15%；酶誘導劑為甲基β-D-葡萄糖醛酸鈉溶液，工作濃度為0.1mg/mL-0.4?mg/mL；裂解緩沖液工作濃度為40-60%；酶底物為6-氯-4-甲基傘形酮-β-D-葡糖苷酸溶液，工作濃度為0.2mg/mL-0.8?mg/mL。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述培養(yǎng)生長時間為1-3小時；熒光檢測時間為1-3小時。
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