[發明專利]單加氧酶突變體及其應用

在審

• 申請號: 202211058447.5
• 申請日: 2022-08-30
• 公開（公告）號: CN115927220A
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發明（設計）人: 洪浩;詹姆斯·蓋吉;張娜;焦學成;馬玉磊;耿宇菡;牟慧艷
• 申請（專利權）人: 凱萊英醫藥集團（天津）股份有限公司
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12P11/00;C12P17/12;C12P17/00;C12R1/19
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 白雪

1.一種單加氧酶突變體，其特征在于，包括

(a)具有SEQ?ID?NO：1所示的氨基酸序列的蛋白質；或

(b)在(a)中的所述氨基酸序列的如下至少一個位點：W60，Y65，D71，Y77，D163，V166，S178，T179，T199，G200，S201，R222，T223，H337，P338，K342，R343，S344，R365，I393，F395，D396，A397，L448，D505，S506，Y508或R509，經過氨基酸突變且具有單加氧酶功能的蛋白質；或

(c)與(a)和(b)中任一項限定的所述氨基酸序列具有80％以上同源性且具有單加氧酶功能的蛋白質。

2.根據權利要求1所述的單加氧酶突變體，其特征在于，所述(b)的所述氨基酸突變各自獨立地選自如下：

D163V或D163A或D163E；

V166S或V166Y或V166M或V166C或V166D或V166H或V166I或V166N或V166K或V166M或V166L或V166A或V166T或V166P或V166G或V166F或；

H337Y或H337M或H337K或H337P或H337F或H337A或H337L或H337E或H337D或H337R；

P338A或P338M或P338L或P338Y；

K342A或K342E或K342L或K342Y；

R343A或R343Y或R343H或R343V；

S344F或S344Y或S344L或S344M或S344K或S344A或S344T或S344N或S344R或S344D或S344E；

R365A或R365G或R365D或R365T或R365Y；

I393A或I393K或I393P或I393W或I393R或I393C或I393M或I393T或I393V或I393Y或I393G或I393L；

F395S或F395Q或F395V；

D396A或D396R或D396S或D396F或D396H或D396Q或D396K；

A397V或A397L或A397I或A397M或A397R或A397H或A397W；

其中，數字前字母代表原始氨基酸，數字后字母代表突變氨基酸；

優選地，所述(c)中，與(a)或(b)中限定的所述氨基酸序列具有85％以上，優選90％以上，更優選95％以上，進一步優選99％以上同源性且具有單加氧酶功能的蛋白質。

3.根據權利要求2所述的單加氧酶突變體，其特征在于，所述單加氧酶突變體的突變包括如下任意一種氨基酸突變：

4.一種DNA分子，其特征在于，所述DNA分子編碼權利要求1至3中任一項所述的單加氧酶突變體。

5.一種重組質粒，其特征在于，所述重組質粒連接有權利要求4所述的DNA分子。

6.一種宿主細胞，其特征在于，所述原核宿主細胞內轉化有權利要求5所述的重組質粒。

7.一種手性亞砜化合物的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括利用權利要求1至3中任一項所述的單加氧酶突變體與式I和/或式Ⅱ所示硫醚類底物進行加氧反應，得到手性亞砜化合物，

R₁選自烷基、環烷基、芳基或雜芳基，所述烷基的C原子數選自1～8，所述環烷基、芳基或雜芳基的C原子數選自5～10；

R₂選自烷基、環烷基、芳基或雜芳基，所述烷基的C原子數選自1～8，所述環烷基、芳基或雜芳基的C原子數選自5～10；

或，所述R1和R2與硫原子共同形成雜環基、碳環基或雜芳基，所述雜環基、碳環基或雜芳基的C原子數選自5～10；

所述雜環基或所述雜芳基中的雜原子各自獨立地選自氮、氧和硫中的至少一種；

所述芳基、雜芳基、碳環基或雜環基各自獨立地未被取代或被取代，當被取代時，取代基選自鹵素、烷氧基或烷基中的至少一個基團。

8.根據權利要求7中所述的制備方法，其特征在于，所述硫醚類底物選自：