[發明專利]一種用生物組織膠水粘連法建立TN大鼠實驗模型的方法

在審

• 申請號: 202211044804.2
• 申請日: 2022-08-30
• 公開（公告）號: CN115362986A
• 公開（公告）日: 2022-11-22
• 發明（設計）人: 母國;盧彬;余璇
• 申請（專利權）人: 自貢市第四人民醫院（自貢市急救中心）
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027
• 代理公司: 成都鼎勝專利代理事務所(普通合伙) 51356
• 代理人: 李想

本發明屬于生物模型加技術領域，尤其涉及一種用生物組織膠水粘連法建立TN大鼠實驗模型的方法，經過選擇SD大鼠、標記切口位置、分離眶下神經和游離神經，再滴入生物組織膠水，縫合傷口等步驟。本發明以生物組織膠水粘連大鼠眶下神經，通過粘連眶下神經有效避免了眶下神經接扎松緊度難以把握以及很容易造成神經缺血損傷的缺點，為TN的機制研究及治療提供模型選擇，助力TN研究的進展；TN模型可重復率高，方法簡便且穩定，操作簡單。

技術領域

本發明屬于生物模型領域，尤其涉及一種用生物組織膠水粘連法建立TN大鼠實驗模型的方法。

背景技術

三叉神經痛(Trigeminal neuralgia，TN)素有“天下第一痛”的稱號，是一種常見的頭面部神經病理性疼痛，流行病學證據表明，大約1-2％的TN病例具有家族聚集性。91％到99％的TN患者常出現扳機點，可由正常的喝水、刷牙、說話、咀嚼、洗臉、觸摸、剃須等動作觸發，嚴重降低患者的生活質量，提高焦慮、抑郁甚至自殺的風險。TN可分為原發性TN和繼發性TN。

原發性TN的發病機制有幾種假說解釋，主要有血管壓迫學說、中樞神經病變學說、離子通道學說和神經肽學說等。有研究發現受壓部位的三叉神經根會出現脫髓鞘的異常改變，這成為了TN的病理基礎。該學說目前得到了廣泛的認可，但卻無法解釋出現的部分無癥狀三叉神經根血管壓迫人群。

另外，根據不同的發病機制開發了不同的TN動物模型，主要包括中樞神經性疼痛模型、外周神經損傷模型和藥物誘導神經病變模型等。關于中樞神經性疼痛模型，Burchiel等通過切除成年貓和獼猴顱骨后在神經根出腦橋處放置鉻制縫線，從而形成慢性神經炎性損傷，并于術后20天觀察到三叉神經根出現明顯的脫髓鞘改變和異常放電，由于該模型建立時操作不易且創傷較大，尚需改進。外周神經損傷模型是目前TN動物模型中比較常見的一種，主要包括眶下神經慢性縮窄模型、三叉神經根壓迫模型、部分神經切斷模型等?？粝律窠浡钥s窄模型(Infraorbital nerve Chronic Constriction Injury,ION-CCI)使用兩根4.0鉻線間隔2mm疏松結扎眶下神經，機制類似于微血管壓迫作用，術后五天即觀察到明顯的行為學變化。ION-CCI模型操作易行，存活率高，是目前應用最廣泛的TN模型之一，但是也可能存在眶下神經結扎時松緊不一的問題。三叉神經根壓迫模型以血管壓迫學說為理論基礎，在大鼠一側眉弓作弧形切口后暴露眶下溝，將一根直徑1mm的塑料絲通過Meckel腔插入三叉神經根區域約1.2cm，經入顱孔造成壓迫，從而對三叉神經根形成慢性壓迫損傷誘發TN，這種模型死亡率很高，操作難度大，需要借助腦外科顯微鏡，容易造成顱內感染。部分神經切斷模型經口內切口暴露眶下神經后切斷眶下神經的外二分之一，模擬慢性疼痛，術后大鼠出現機械痛覺過敏，且可被普瑞巴林有效緩解，但這種方式難以模擬慢性神經炎癥，建模成功率很低，很少能產生典型的慢性神經病理性疼痛模型。藥物誘導神經病變模型可通過注射抗腫瘤藥物、青霉素G-K或福爾馬林等誘導實驗動物產生行為學改變，這類模型建立方法操作較為簡便，但是模擬的是炎癥急性刺激，這類模型均存在一些不可控的干擾因素，且難以造成長期的慢性疼痛，不太符合使用。

其中，三叉神經結扎模型同上所述分為眶內神經結扎模型(圖2A-D)和眶下神經結扎(ION-CCI)模型(圖1，圖2E-H)。神經結扎模型的缺陷有創面較大，容易并發感染，然后也是最大的問題就是使用可吸收縫線結扎神經的松緊程度很難把握，雖然能模擬慢性神經卡壓過程，但是結扎過程完全靠操作者經驗和手感，結扎過緊會造成神經壞死而不能產生慢性疼痛，結扎過松則不會產生疼痛刺激。

由于目前TN的發病機制至今沒有被完全解釋清楚，這導致了這部分患者的治療效果有限?，F采用最多且最可靠的TN模型建立方式是神經卡壓制，最大的障礙來自于TN動物模型的建立欠缺模擬真實臨床狀態的效能。所以構建可重復率高，方法簡便且穩定的TN模型方法是目前所需。

發明內容