[發明專利]一種鼠李糖脂和蚯蚓聯合修復二惡英污染土壤的方法

在審

• 申請號: 202211040852.4
• 申請日: 2022-08-29
• 公開（公告）號: CN115446107A
• 公開（公告）日: 2022-12-09
• 發明（設計）人: 應蓉蓉;張亞;葉茂;蘆園園;黃丹;馮艷紅;張曉雨;胡哲偉;趙彩衣;季文兵;尹愛經
• 申請（專利權）人: 生態環境部南京環境科學研究所
• 主分類號: B09C1/10
• 分類號: B09C1/10;B09C1/08;C12P19/44;C12R1/385
• 代理公司: 北京棧橋知識產權代理事務所(普通合伙) 11670
• 代理人: 張建生

1.一種鼠李糖脂和蚯蚓聯合修復二惡英污染土壤的方法，其特征在于，包括：

S1、鼠李糖脂的制備

利用銅綠假單胞桿菌發酵制備鼠李糖脂，備用；

S2、獲取蚯蚓種

S3、土壤預處理

對待修復的污染土壤進行松土處理，去除雜物后將表面耙平，形成處理層；其中，松土深度為30～50cm深度；

S4、土壤修復處理

S4-1、鼠李糖脂溶液的投放

將鼠李糖脂與去離子水混合制備得到濃度為300～1000mg/L的鼠李糖脂溶液，然后對S3所形成的處理層按照2～3L/m²的施加量施加鼠李糖脂溶液，再次對土壤進行松土處理致使鼠李糖脂溶液與土壤混合均勻；

S4-2、土壤再處理

在S4-1處理后的處理層內每間隔3～5m設置深度為20～30cm、頂部寬度為10～15cm、底部寬度為5～8cm縱截面為等腰梯形結構的引水渠(1)；并在所述引水渠(1)上每間隔8～10m設置內徑為30～50cm、深度為30～50cm的輔助飼養基孔(2)；在所述輔助飼養基孔(2)中投放占輔助飼養基孔(2)容積40～60％的有機肥；

S4-3、蚯蚓種的投放

按照30～80條/m²的投放密度將蚯蚓種投放至污染土壤中；

S4-4、土壤處理修復

利用所述引水渠(1)保持污染土壤含水率為40～50％，保持在該含水量的條件下持續修復12d；然后在自然條件下修復21～30d。

2.如權利要求1所述的一種鼠李糖脂和蚯蚓聯合修復二惡英污染土壤的方法，其特征在于，所述步驟S1中，所述發酵制備鼠李糖脂的方法為：

S1-11、發酵培養

將銅綠假單胞桿菌經過活化后置于第一液體發酵培養基中在溫度為35～37℃、振蕩轉速為230～250r/min的條件下發酵培養4～7d，得到發酵液；

S1-12、提取鼠李糖脂

將發酵液在7000～7500r/min的條件下離心處理20～25min除去菌體取上清液，然后利用萃取法提取得到鼠李糖脂。

3.如權利要求2所述的一種鼠李糖脂和蚯蚓聯合修復二惡英污染土壤的方法，其特征在于，所述步驟S1-11中，所述第一液體發酵培養基成分為：甘油40～50g/L、酵母膏0.2g/L、NaNO₃6.5g/L、KH₂PO₄1.0g/L、NaCl0.5g/L、Na₂HPO₄·12H₂O1.0g/L、FeSO₄·7H₂O0.3g/L、MgSO₄·7H₂O0.1g/L、去離子水1000ml，pH＝6.5～7.0。

4.如權利要求2所述的一種鼠李糖脂和蚯蚓聯合修復二惡英污染土壤的方法，其特征在于，所述步驟S1-12中，所述萃取法為：利用濃度為98％的硫酸調節上清液pH至1～1.5，在4～8℃條件下靜置10～12h；然后用體積比為2：1的氯仿-甲醇混合液等體積萃取上清液，靜置分層后取下層；然后對中層利用氯仿-甲醇混合液進行二次萃取，靜置分層后取下層；合并兩次萃取液后蒸干溶劑得到鼠李糖脂。

5.如權利要求1所述的一種鼠李糖脂和蚯蚓聯合修復二惡英污染土壤的方法，其特征在于，所述步驟S1中，所述發酵制備鼠李糖脂的方法為：

S1-21、發酵培養

將銅綠假單胞桿菌經過活化后置于第二液體發酵培養基中在溫度為28～32℃、振蕩轉速為280～300r/min的條件下發酵培養8～10d，得到發酵液；

S1-22、提取鼠李糖脂

將發酵液在5000～5500r/min的條件下離心處理25～30min除去菌體取上清液，然后利用膜分離法提取得到鼠李糖脂。