[發明專利]一種生物樣本中6-磷酸葡萄糖含量測定試劑盒及方法

在審

• 申請號: 202211040652.9
• 申請日: 2022-08-29
• 公開（公告）號: CN115343237A
• 公開（公告）日: 2022-11-15
• 發明（設計）人: 劉麗燕;高司琪;張銘珈;趙金慧;馮任南
• 申請（專利權）人: 哈爾濱醫科大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N1/38
• 代理公司: 徐州拉沃智佳知識產權代理有限公司 32455
• 代理人: 劉鵬

本發明公開了一種生物樣本中6?磷酸葡萄糖含量測定試劑盒及方法，該試劑盒包括由三羥甲基氨基甲烷?鹽酸溶液組成的溶劑、6?磷酸葡萄糖標準溶液、由煙酰胺腺嘌呤二核苷酸、氮四唑藍、吩嗪硫酸甲酯組成的試劑一、由6?磷酸葡萄糖脫氫酶組成的試劑二、由濃鹽酸組成的終止劑。本方法的原理為利用6?磷酸葡萄糖脫氫酶及顯色劑進行電子傳遞，產物在堿性條件下呈現紫紅色，利用酶標儀測定吸光度值，計算6?磷酸葡萄糖濃度。本方法樣本前處理過程簡單易行，試劑種類少，樣本用量少，節約成本。本方法可應用測定大量樣品，重復性好，準確度高，穩定性好，適合于常規實驗室應用。

技術領域

本發明屬于6-磷酸葡萄糖檢測技術領域，具體涉及一種生物樣本中6-磷酸葡萄糖含量測定試劑盒及方法。

背景技術

6-磷酸葡萄糖(Glucose 6-phosphate，G6P)是糖代謝和糖異生途徑的中間產物，葡萄糖進入細胞后被己糖激酶磷酸化為葡萄糖六磷酸，隨后即可進入磷酸戊糖途徑。這條途徑的主要功能是以煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸的形式提供還原力，用于維持細胞內氧化還原穩態和脂肪酸和固醇類物質的生物合成；同時產生5-磷酸核糖作為核酸合成的前體。在紅細胞中，磷酸戊糖途徑是NADPH產生的唯一來源，故而對于保護細胞免受氧化損傷非常重要。因此 6-磷酸葡萄糖具有十分重要的生理意義。

6-磷酸葡萄糖的測定方法通常有質譜法、高效液相色譜法和酶學法。質譜法須要配備昂貴的質譜儀；高效液相色譜法雖然可以測定6-磷酸葡萄糖,但是在試驗過程中發現不能有效分離6-磷酸葡萄糖、果糖-1,6-二磷酸和3-磷酸甘油酸等成分。而酶學法具有特異性好、抗干擾能力強、操作簡便、耗時少、經濟和樣品用量少等優點，便于實際應用。基于此，發明了一種簡單、快速、穩定的酶標比色法檢測生物樣本(血液、組織和細胞)中6-磷酸葡萄糖含量的方法。反應原理如下所示：

公開號為CN109609594A的專利文件中，公開了一種基于微量法的6-磷酸葡萄糖含量測定試劑盒及方法，該方法采用了G6PDH可催化G6P和NADP+成NADPH，直接測定 NADPH增加速率來反映G6P含量的高低，該方法的檢測穩定性受催化反應的影響，同時樣本用量較大(血清樣本100μL)。

發明內容

針對現有技術中的不足之處，本發明的目的在于提供一種生物樣本中6-磷酸葡萄糖含量測定試劑盒及方法，具有操作簡便，快捷有效，重復性好，準確度高等特點。

為了達到上述目的，本發明技術方案如下：

一種生物樣本中6-磷酸葡萄糖含量測定試劑盒，包括試劑一和試劑二，

試劑一：由煙酰胺腺嘌呤二核苷酸、氮四唑藍、吩嗪硫酸甲酯組成，粉劑×1瓶，-20℃保存；

試劑二：由6-磷酸葡萄糖脫氫酶組成，粉劑×1瓶，-20℃保存。

進一步的，所述試劑一中所含的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸的質量為1.76mg，氮四唑藍的質量為4.4mg，吩嗪硫酸甲酯的質量為0.13mg。

進一步的，所述試劑二中所含的6-磷酸葡萄糖脫氫酶的質量為15mg。

進一步的，還包括溶劑，溶劑由三羥甲基氨基甲烷-鹽酸溶液組成，液體100mL×1瓶， 4℃保存。

更進一步的，所述三羥甲基氨基甲烷-鹽酸溶液的pH值為8.8。

進一步的，還包括6-磷酸葡萄糖標準溶液，所述6-磷酸葡萄糖標準溶液的濃度為657.89 μmol/L，4℃保存。

進一步的，還包括終止劑，終止劑由鹽酸組成，液體50mL×1瓶，室溫保存。

更進一步的，所述鹽酸的濃度為1.0mol/L。

進一步的，還包括96孔板，標記7個孔作為主孔，用于分別加入濃度不同濃度的6-磷酸葡萄糖標準溶液；標記其余各孔作為副孔，分別加入待測液和上述其他試劑與溶劑。