[發明專利]一種靶向調控細胞膜表面EGFR二聚化的DNA結構及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202211038908.2
• 申請日: 2022-08-29
• 公開（公告）號: CN115992144A
• 公開（公告）日: 2023-04-21
• 發明（設計）人: 何磊良;王婭;熊亞敏;宋露露;姚峰;吳擁軍
• 申請（專利權）人: 鄭州大學
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;C12N15/10;C12N5/09;C12N5/071
• 代理公司: 鄭州先風知識產權代理有限公司 41127
• 代理人: 馬柯柯

1.一種靶向調控細胞膜表面EGFR二聚化的DNA結構，其特征在于，所述DNA結構為利用核酸自組裝構建的雙鏈DNA橋，所述雙鏈DNA橋包括適配體探針A和適配體探針B，以及和適配體探針A和適配體探針B互補的互補鏈C。

2.根據權利要求1所述靶向調控細胞膜表面EGFR二聚化的DNA結構，其特征在于，所述雙鏈DNA橋為雙鏈DNA橋1至DNA橋7中的一個，所述雙鏈DNA橋1至DNA橋7分別由核酸適配體探針A1、B1和互補鏈C1，A2、B2和互補鏈C2，A3、B3和互補鏈C3，A4、B4和互補鏈C4，A5、B5和互補鏈C5，A6、B6和互補鏈C6，A7、B7和互補鏈C7組成，所述A1、B1、C1，A2、B2、C2，A3、B3、C3，A4、B4、C4，A5、B5、C5，A6、B6、C6，A7、B7、C7的核酸序列如SEQ?ID?NO:1-21所示。

3.根據權利要求2所述靶向調控細胞膜表面EGFR二聚化的DNA結構，其特征在于，所述雙鏈DNA橋3中還包括輔助鏈D3，所述輔助鏈D3的核酸序列如SEQ?ID?NO:22所示。

4.如權利要求1至3任一項所述靶向調控細胞膜表面EGFR二聚化的DNA結構的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：分別取各雙鏈DNA橋的單核酸鏈母液A1、B1、C1，A2、B2、C2，A3、B3、C3、D3，A4、B4、C4，A5、B5、C5，A6、B6、C6，A7、B7、C7水浴加熱后降至室溫，各單核酸鏈母液濃度相同，并按照體積比1:1:1混合對應組成每個雙鏈DNA橋的單核酸鏈母液，室溫反應后既得雙鏈DNA橋1至DNA橋7。

5.根據權利要求4所述靶向調控細胞膜表面EGFR二聚化的DNA結構的制備方法，其特征在于，各單核酸鏈母液在95℃水浴加熱10min。

6.根據權利要求4所述靶向調控細胞膜表面EGFR二聚化的DNA結構的制備方法，其特征在于，室溫反應15min。

7.如權利要求1至3任一項所述靶向調控細胞膜表面EGFR二聚化的DNA結構的應用，其特征在于，包括以下步驟：

(1)分別用PBS制備核酸適配體A1和B1、A2和B2、A3和B3、A4和B4、A5和B5、A6和B6、A7和B7的混合探針溶液，互補鏈C1、C2、C3、C4、C5、C6、和C7的溶液，輔助鏈D3的溶液；

(2)待培養的實驗細胞融合率大于80％時，棄去原培養液，用PBS洗滌細胞后，加入不含胎牛血清的細胞培養基繼續培養24h對細胞進行饑餓處理，再次用PBS洗滌細胞后分別加入對應核酸適配體探針組成的混合探針溶液，37℃孵育一段時間后，用PBS洗去多余未結合探針，加入對應的互補鏈再次孵育一段時間后用PBS洗去未結合的核酸鏈，即完成。

8.根據權利要求7所述靶向調控細胞膜表面EGFR二聚化的DNA結構的應用，其特征在于，步驟(1)中混合探針溶液中單核酸鏈濃度和對應的互補鏈、輔助鏈相同。

9.根據權利要求7所述靶向調控細胞膜表面EGFR二聚化的DNA結構的應用，其特征在于，步驟(2)中的細胞為A549細胞。