[發明專利]構建ABCA12基因突變的斑色魚鱗癬模型豬核移植供體細胞的試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202211030707.8
• 申請日: 2022-08-26
• 公開（公告）號: CN115976018A
• 公開（公告）日: 2023-04-18
• 發明（設計）人: 牛冬;汪滔;馬翔;王磊;程銳;方園;趙澤英;胡世芳
• 申請（專利權）人: 南京啟真基因工程有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N9/22;C07K19/00;C12N5/10;C12N15/877;C12N15/70;A01K67/027;A61K49/00;C12Q1/02;C12R1/19
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

本發明公開了構建ABCA12基因突變的斑色魚鱗癬模型豬核移植供體細胞的試劑盒及其應用。本發明提供了包括SEQ?ID?NO：16所示ABCA12?gRNA1、SEQ?ID?NO：17所示ABCA12?gRNA4和NCN蛋白的試劑盒。本發明還提供了制備重組豬細胞的方法：將ABCA12?gRNA1、ABCA12?gRNA4和NCN蛋白共轉染豬細胞，得到重組豬細胞。所述重組豬細胞為ABCA12基因發生突變的重組豬細胞。試劑盒的用途為：制備重組豬細胞；制備斑色魚鱗癬模型豬；制備斑色魚鱗癬細胞模型或斑色魚鱗癬組織模型或斑色魚鱗癬器官模型。本發明對于斑色魚鱗癬藥物的研發及揭示該病的發病機制具有重大應用價值。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體屬于基因編輯技術領域，更具體涉及構建ABCA12基因突變的斑色魚鱗癬模型豬核移植供體細胞的試劑盒及其應用。

背景技術

斑色魚鱗癬(Harlequin?ichthyosis，HI)，又稱為小丑魚鱗癬，是一種常染色體隱性遺傳皮膚病，該疾病為先天性魚鱗癬中最嚴重的一種類型，其特征是胎兒體表皮膚角質層的異常增厚。患有該病的患者，皮膚可見呈紅色的巨大菱形鱗片，并伴有嚴重的顱部和面部畸形。角質化的鱗片狀皮膚極大地限制了嬰兒的活動。在正常皮膚褶皺的地方會發生皸裂，因此很容易造成水分、體溫的調控失衡，并容易被細菌或其他污染物感染，有致命危險。

斑色魚鱗癬主要由ABCA12基因突變導致。皮膚表皮可細分為5層，角質層為最外層，由死掉的角質細胞堆積而成。活的角質細胞中有富含脂質的層板顆粒，ABCA12為層板顆粒膜上的蛋白質，負責將脂質運送至顆粒中。顆粒中的脂質最后會經胞釋作用充滿細胞間隙。因此在角質層中還有脂質層填充在死掉的角質細胞間，和皮膚的脫屑與防水作用有關。斑色魚鱗癬患者的角質細胞中層板顆粒的ABCA12蛋白缺乏或異常，使角質層喪失脂質，皮膚脫屑作用無法進行，所以造成角質大量堆積、皮膚滲透性異常。

研究斑色魚鱗癬的發生發展機制及研發相應的藥物均需要在動物模型的基礎上進行，目前常用的動物模型為小鼠模型，然而小鼠不論從體型、器官大小、生理、病理等方面都與人相差巨大，不能真實地模擬人類正常的生理、病理狀態。豬作為大動物，其體型大小和生理功能與人類近似，易于大規模繁殖飼養，而且在倫理道德及動物保護等方面要求較低，是理想的人類疾病模型動物。

基因編輯是近年來不斷取得重大發展的一種生物技術，其包括從基于同源重組的基因編輯到基于核酸酶的ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9等編輯技術，其中CRISPR/Cas9技術是當前最先進的基因編輯技術。目前，基因編輯技術被越來越多地應用到動物模型的制作上。

發明內容

本發明的目的是提供構建ABCA12基因突變的斑色魚鱗癬模型豬核移植供體細胞的試劑盒及其應用。

本發明提供了一種試劑盒，包括ABCA12-gRNA1、ABCA12-gRNA4和NCN蛋白。

本發明還提供了一種試劑盒，包括ABCA12-gRNA1、ABCA12-gRNA4和PRONCN蛋白。

本發明還提供了一種試劑盒，包括ABCA12-gRNA1、ABCA12-gRNA4和特異質粒。

以上任一所述試劑盒還包括豬細胞。

本發明提供了ABCA12-gRNA1、ABCA12-gRNA4和NCN蛋白在制備試劑盒中的應用。

本發明還提供了ABCA12-gRNA1、ABCA12-gRNA4和PRONCN蛋白在制備試劑盒中的應用。

本發明還提供了ABCA12-gRNA1、ABCA12-gRNA4和特異質粒在制備試劑盒中的應用。

以上任一所述試劑盒的用途為如下(a)或(b)或(c)：(a)制備重組豬細胞；(b)制備斑色魚鱗癬模型豬；(c)制備斑色魚鱗癬細胞模型或斑色魚鱗癬組織模型或斑色魚鱗癬器官模型。