[發明專利]一種惡性黑色素瘤進行脫色素的方法

在審

• 申請號: 202211028956.3
• 申請日: 2022-08-26
• 公開（公告）號: CN115096682A
• 公開（公告）日: 2022-09-23
• 發明（設計）人: 曹放;黃小征;周立新
• 申請（專利權）人: 北京腫瘤醫院（北京大學腫瘤醫院）
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/34;G01N1/44
• 代理公司: 北京中和立達知識產權代理有限公司 11756
• 代理人: 楊磊

本發明涉及一種惡性黑色素瘤進行脫色素的方法，該方法通過使用3%過氧化氫加Tris?HCl緩沖液與硼酸鹽緩沖液混合加熱對樣本中的黑色素進行脫色，即能很好地與我們免疫組化自動化檢測平臺融合，同時又對細胞的形態、結構和細胞內分子影響最小，不影響后續的免疫組化檢測，可有效輔助黑色素瘤疾病的診療。

技術領域

本發明屬于檢測技術領域，具體的，本發明涉及一種惡性黑色素瘤進行脫色素的方法。

背景技術

惡性黑色素瘤是病理科日常工作中總是會不時遇到的一類腫瘤，尤其是在腫瘤專科醫院。隨著臨床診療的需要，病理醫生不僅需要對這類疾病做出正確的診斷，還需要對它的生物學行為，包括核分裂像、浸潤的深度、治療后腫瘤消退評級以及蛋白分子特征等等多個方面進行評定。

DAB(二氨基聯苯胺)是免疫組化染色常用的染色劑底物，可在過氧化氫的存在下失去電子而呈現出顏色變化的積累，形成淺棕色不溶產物。用于檢測過氧化物酶的活性，靈敏度高，特異性好，是辣根過氧化物酶（HRP）結合物最常用的底物，常用于進行細胞或組織染色檢測。然而因為黑色素瘤中往往有大量的黑色素沉積，這些黑色素不僅遮蓋了正常的組織結構和細胞形態，而且它們的顏色與DAB顯色劑所產生的黃色近似，會導致結果難以區分。雖然有一些替代的免疫組化染色底物如3-氨基-9-乙基咔唑（AEC），該底物顯色后為紅色，可以避免顏色上的交叉，但是該底物染色為非常規免疫組化技術，并不是所有的抗體均能適用這種技術；另外HRP/AEC光穩定性差，在光照下容易褪色，不適用切片的長期保存。在免疫組化染色之前對切片進行黑色素脫色素處理，而不對免疫組化染色技術本身進行改動，這種處理技術更符合臨床上較大工作量的實際需求以及自動化免疫組化染色流程。

最早的黑色素脫色技術始于1897年，最初采用0.1%高錳酸鉀進行氧化脫色素，隨后在不同的實驗條件下多種脫色方法得以發展，然而僅有兩種脫色方法因為脫色效果較好以及較強的可操作性而常被使用。這兩種方法分別為高錳酸鉀-草酸脫色法和過氧化氫脫色法。這兩種方法均利用了黑色素在堿性溶液中是可溶的特性，能夠較為徹底地對黑色素顆粒進行溶解。雖然目前針對這兩種脫色方法的研究較多，但是在不同的實驗條件下，這兩種方法仍有各自的局限性，如脫色時間過長、脫色效果不穩定、酸堿環境影響后期免疫組化染色以及高溫導致組織結構破壞、染色出現脫片現象等等。另外，在臨床病理的實際操作過程中，往往需要對福爾馬林固定的切片進行脫色素處理，并且后期需要跟自動化免疫組化程序進行對接，因此需要一種簡單易行、但又脫色效果穩定的技術來滿足臨床需求。

發明內容

為了彌補現有技術的缺陷，本發明提供一種對惡性黑色素瘤進行脫色素的方法，該方法既能很好地與自動化免疫組化檢測平臺融合，同時又對細胞的形態、結構和細胞內分子影響最小，不影響后續的免疫組化檢測。為了實現上述技術效果，本發明提供如下的技術方案：

本發明的第一個方面，提供一種黑色素瘤脫色試劑，所述試劑包含：3%過氧化氫加Tris-HCl緩沖液與0.01M硼酸鹽緩沖液。

本發明的第二個方面，提供一種對惡性黑色素瘤進行脫色素的方法，所述方法包括如下步驟：

（1）黑色素瘤組織樣本進行脫蠟處理；

（2）將脫蠟處理后的組織樣本與上述脫色試劑在90℃的溫度下接觸，使組織內的黑色素逐漸消失。

本發明的第三個方面，提供上述脫色試劑以及脫色素的方法在制備用于診斷黑色素瘤的產品中的應用。

在一種實施方式中，所述產品為試劑或試劑盒。

附圖說明

附圖用來提供對本發明的進一步理解，并且構成說明書的一部分，與本發明的實施一起用于解釋本發明，并不構成對本發明的限制。在附圖中：

圖1 為高錳酸鉀溶液的脫色效果。組織樣本為直腸惡性黑色素瘤（A、C、E）和皮膚惡性黑色素瘤（B、D、F）；A-D為脫色后HE圖片，E、F為脫色后進行S-100免疫組化檢測。A、B放大20倍，C、D放大400倍，E、F放大200倍，標尺位于左下方。