[發明專利]一種間充質干細胞外囊泡的微流控芯片電泳檢測方法

在審

• 申請號: 202211027803.7
• 申請日: 2022-08-25
• 公開（公告）號: CN115326907A
• 公開（公告）日: 2022-11-11
• 發明（設計）人: 王立升;孫瑞;尤暉;劉亞平;黃紅日;王輝煌;劉旭
• 申請（專利權）人: 廣西大學;廣西泰美人生生物科技有限公司
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447;B01L3/00
• 代理公司: 北京盛廣信合知識產權代理有限公司 16117
• 代理人: 秦全

本發明公開了一種間充質干細胞外囊泡的微流控芯片電泳檢測方法，屬于細胞外囊泡檢測技術領域。該方法包括以下步驟：將間充質干細胞外囊泡樣本加入微流控芯片電泳通道中，進行檢測，分別得到間充質干細胞外囊泡樣本的亞群外泌體和微囊泡的信號峰，根據信號峰對間充質干細胞外囊泡亞群進行定性分析；檢測過程中使用的電泳緩沖液包括質量比為1:1的2?(N?嗎啉)?乙磺酸和L?組氨酸。本發明實現了間充質干細胞外囊泡快速高效的檢測，可以在短時間內分離并檢測出外泌體和微囊泡兩個亞群的峰信號，并且操作簡單、無需衍生化處理、樣品消耗量少，大大降低了成本。

技術領域

本發明涉及細胞外囊泡檢測技術領域，特別是涉及一種間充質干細胞外囊泡的微流控芯片電泳檢測方法。

背景技術

間充質干細胞具有增殖能力強、免疫原性低、多向分化潛能等特點，被廣泛地應用于再生醫學和各種疾病的組織修復與治療中。間充質干細胞通過旁分泌機制分泌細胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)，內含蛋白質、mRNAs、miRNAs和DNA等多種物質，在細胞通訊中發揮作用。研究表明細胞外囊泡與母體細胞具有相似的作用，其免疫原性更低，并且具有無腫瘤形成的優點，因此引起了研究人員的廣泛關注。根據顆粒尺寸大小可將EVs分為兩個不同的亞群：外泌體，直徑在30-150nm內；微囊泡，直徑在200-1000nm內。它們在細胞間通訊和許多生理、病理過程的調控中各自發揮著重要的作用，但由于大小、密度和生物組成的重疊特性，使得它們難以完全區分，因此在研究EVs時單一亞群的個體特征信息可能會被掩蓋或丟失，為了更多地了解外泌體和微囊泡的共有和特有的物理化學性質，發展新的檢測方法是必不可少的。

目前常用于檢測細胞外囊泡的方法有透射電鏡，納米粒徑跟蹤分析,蛋白免疫印跡，酶聯免疫吸附試驗和流式細胞術等。然而這些方法面臨著步驟復雜、分析時間長等問題，難以應用于臨床。毛細管電泳分離方法是一類新型的液相分離技術，使分析生物分子得以從微升水平進入納升水平，并使單細胞分析，乃至單分子分析成為可能。有研究使用毛細管電泳結合紫外光檢測器或激光誘導熒光檢測器實現了外泌體的檢測分析，初步顯示了基于電泳分離分析的優勢，但是這些方法都需要繁雜的衍生化反應，存在低信噪比和光漂白等問題。

發明內容

本發明的目的是提供一種間充質干細胞外囊泡的微流控芯片電泳檢測方法，以解決上述現有技術存在的問題，該方法能夠在1min內實現間充質干細胞外囊泡兩個亞群的分離與檢測，彌補了傳統的細胞外囊泡分析方法無法對亞群進行分離分析的不足。

為實現上述目的，本發明提供了如下方案：

本發明提供一種間充質干細胞外囊泡的微流控芯片電泳檢測方法，包括以下步驟：

將間充質干細胞外囊泡樣本加入微流控芯片電泳通道中，進行檢測，分別得到間充質干細胞外囊泡樣本的亞群外泌體和微囊泡的信號峰，根據信號峰對間充質干細胞外囊泡亞群進行定性分析；

檢測過程中使用的電泳緩沖液包括質量比為1:1的2-(N-嗎啉)-乙磺酸和L-組氨酸。

進一步地，所述電泳緩沖液的濃度為40mM，pH值為6.0。

進一步地，所述檢測的過程為：

進樣階段，樣品由負極到正極，進樣電壓為500v，進樣時間為40s；分離階段，樣品由負極到正極，分離電壓為1000v，運行溫度25℃，并將分離階段的樣品電導信號轉為電壓信號，至出現兩個明顯的信號峰，結束檢測。

進一步地，先出現的信號峰為間充質干細胞外囊泡亞群外泌體，后出現的信號峰為間充質干細胞外囊泡亞群微囊泡。

進一步地，所述間充質干細胞外囊泡樣本是將間充質干細胞外囊泡與所述電泳緩沖液按體積比1:1混勻后得到的。

進一步地，所述間充質干細胞外囊泡樣本的濃度為10⁹-10¹¹顆粒/mL。