[發(fā)明專利]一種抑制α-葡萄糖苷酶活性的杏仁小分子肽及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202211024751.8
• 申請日: 2022-08-25
• 公開（公告）號: CN115466305A
• 公開（公告）日: 2022-12-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 顧欣;叢之慧;李迪;肖國生;周法婷;張彭
• 申請（專利權(quán)）人: 重慶三峽學(xué)院
• 主分類號: C07K5/078
• 分類號: C07K5/078;A61P3/10;A23L33/18;A61K38/05
• 代理公司: 重慶晶智匯知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 50229
• 代理人: 李靖

一種α?葡萄糖苷酶抑制肽，其氨基酸序列為脯氨酸?精氨酸（PR），結(jié)構(gòu)式為。本發(fā)明公開的一種杏仁小分子肽脯氨酸?精氨酸（PR），可以顯著抑制α?葡萄糖苷酶的活性，其體外α?葡萄糖苷酶抑制能力IC₅₀值為19.79±0.006μM，此外，該小分子肽與α?葡萄糖苷酶具有優(yōu)異的結(jié)合位點，使得結(jié)合程度較高，更容易有效發(fā)揮其對α?葡萄糖苷酶的抑制作用，可用于降血糖方面的應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種抑制α-葡萄糖苷酶活性的杏仁小分子肽及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

糖尿病以高血糖為特征的代謝性疾病，血糖則是由于胰島素分泌缺陷或者生物作用受損，或者二者兼有引起的，糖尿病已經(jīng)成為嚴重威脅人類健康的慢性疾病之一，由于糖尿病所引起的冠心病、腎病、視網(wǎng)膜病及神經(jīng)病變等是造成病人致死、致殘的主要原因。

葡萄糖苷酶抑制劑是糖尿病患者常用的一類降低血糖藥物，葡萄糖苷酶抑制劑可以抑制小腸葡萄糖苷酶對食物中淀粉、蔗糖等的吸收，延遲碳水化合物的吸收，從而起到降低餐后血糖的作用。現(xiàn)有的抑制葡萄糖苷酶活性的抑制劑藥物主要有阿卡波糖(acrbose)、伏格列波糖(voglibose)和米格列醇(midlitol)，但是這些藥物長期服用會造成胃脹氣、腹瀉等副作用。

杏仁具有降血糖、降血脂、降血壓、抗癌等生物活性。經(jīng)常吃杏仁可以起到降低膽固醇、促進心血管健康，還可以控制血糖水平，現(xiàn)已有報道杏仁多肽具有降血糖功效，但是能夠引起血糖下降的路徑很多，而杏仁多肽種類成千上萬種，并不是任何杏仁多肽都具備該功能。因而尋找能夠降血糖的杏仁肽，并明確其作用機制尤其重要，為后續(xù)降血糖藥物及保健品的研發(fā)奠定基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于提供一種杏仁小分子肽，能有效抑制α-葡萄糖苷酶活性，具有優(yōu)異的降血糖功能。

本發(fā)明目的通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)：

一種抑制α-葡萄糖苷酶活性的杏仁小分子肽，其特征在于：其氨基酸序列為脯氨酸-精氨酸(PR)，結(jié)構(gòu)式為

采用胃蛋白酶、胰蛋白酶和蛋白酶K作為復(fù)合酶水解杏仁蛋白，分離出上述小分子肽PR，通過分子對接，發(fā)現(xiàn)其與α-葡萄糖苷酶具有9個結(jié)合位點，具有優(yōu)異的結(jié)合力。在體外對α-葡萄糖苷酶具有優(yōu)異的抑制能力，其IC₅₀為19.79±0.006μM。

為了進一步確定對于α-葡萄糖苷酶的抑制作用，是小分子肽PR帶來的作用，通過人工合成手段，制備出高純度的PR，具體合成過程由中國西安納威生物技術(shù)有限公司完成，合成的PR小分子肽純度為95％以上，PR的分子量為271.05。

上述杏仁小分子肽的應(yīng)用，具體在制備抑制α-葡萄糖苷酶活性的藥物或保健品中的應(yīng)用。

發(fā)現(xiàn)PR可激活高糖誘導(dǎo)的IR HepG2細胞的IRS-1/PI3K/AKT和AMPK信號通路。在IRHepG2細胞中，100μmol/L的PR肽通過促進GLUT4的表達和轉(zhuǎn)運而增加葡萄糖的攝取和轉(zhuǎn)運。通過調(diào)價糖原合成直接相關(guān)的p-GSK3β(Ser9)、GSK3β和GS的蛋白表達，影響糖原合成。

本發(fā)明具有如下技術(shù)效果：

本發(fā)明公開的一種杏仁小分子肽脯氨酸-精氨酸(PR)，可以顯著抑制α-葡萄糖苷酶的活性，其體外α-葡萄糖苷酶抑制能力IC₅₀值為19.79±0.006μM，此外，該小分子肽與α-葡萄糖苷酶具有優(yōu)異的結(jié)合位點，使得結(jié)合程度較高，更容易有效發(fā)揮其對α-葡萄糖苷酶的抑制作用，可用于降血糖方面的應(yīng)用。

附圖說明

圖1：各小分子肽與α-葡萄糖苷酶分子對接位點圖。

圖2：本發(fā)明中小分子肽PR對應(yīng)的HPLC液相圖。

圖3：本發(fā)明中小分子肽PR對應(yīng)的LCMS質(zhì)譜圖。