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[發明專利]小麥株高主效基因的多重KASP標記引物組及應用在審

專利信息
申請號: 202211020169.4 申請日: 2022-08-24
公開(公告)號: CN115807119A 公開(公告)日: 2023-03-17
發明(設計)人: 姜朋;張旭;吳磊;何漪;李暢 申請(專利權)人: 江蘇省農業科學院
主分類號: C12Q1/6895 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
代理公司: 江蘇圣典律師事務所 32237 代理人: 楊文晰
地址: 210014 江*** 國省代碼: 江蘇;32
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摘要:
搜索關鍵詞: 小麥 株高主效 基因 多重 kasp 標記 引物 應用
【權利要求書】:

1. 一組小麥株高主效基因的多重KASP標記引物組,其特征在于,所述引物組由核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示的引物F、核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示的引物H、核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的通用引物R組成。

2.如權利要求1所述多重KASP標記引物組在同時檢測小麥Rht-B1和Rht-D1基因中的應用。

3.如權利要求2所述的應用,其特征在于,所述應用是指以所述多重KASP標記引物組對小麥樣品進行PCR擴增后,再對擴增產物進行熒光檢測;如果熒光檢測結果為藍色,則說明樣品小麥的基因型為Rht-B1b/ Rht-D1a; 如果熒光檢測結果為紅色,則說明樣品小麥的基因型為Rht-B1a/ Rht-D1b;如果熒光檢測結果為綠色,則說明樣品小麥的基因型為Rht-B1b/Rht-D1b;如果熒光檢測結果為D黑色,則說明樣品小麥的基因型為Rht-B1a/Rht-D1a或空白。

4.如權利要求3所述的應用,其特征在于,所述PCR擴增是指:

PCR反應體系:KASP Assay Mix 0.07 μL,濃度為20 ng/μL的小麥模板DNA 2.43 μL,2×KASP Master Mix 補足至5 μL;

其中,每100μL所述KASP Assay Mix包括:濃度為100 μM的所述引物F 12 μL ,濃度為100 μM的所述引物H 12 μL ,濃度為100 μM的所述通用引物R 30μL,以 ddH2O補足至100μL;

PCR反應程序:94℃ 15 min;94℃ 20 s,61-55℃ 1 min,每個循環降低0.6℃,共10個循環;94℃ 20 s,55℃ 1 min,共26個循環。

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