[發(fā)明專利]一種磁珠法真菌基因組DNA提取試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202211020061.5
• 申請日: 2022-08-24
• 公開（公告）號: CN115418365A
• 公開（公告）日: 2022-12-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 寇增強;劉盼;隋修磊;劉海龍
• 申請（專利權(quán)）人: 山東博弘基因科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種磁珠法真菌基因組DNA提取試劑盒，包括以下組分：裂解液、磁珠、RNase A溶液、前處理溶液A、清洗液I、清洗液II、洗脫液。所述裂解液包含CHAPS、鹽酸胍、尿素、非離子表面活性劑、緩沖液、聚己縮胍，三異丁基鋁；本發(fā)明通過試劑配方的優(yōu)化，提高了真菌基因組DNA的提取效率。本發(fā)明將裂解液與前處理溶液A溶液加在同一孔位中，CHAPS、鹽酸胍、尿素等、聚己縮胍，三異丁基鋁在裂解真菌外殼結(jié)構(gòu)的同時，結(jié)合異丙醇等沉淀基因組DNA，使基因組DNA快速的吸附在磁珠上，極大地提高了提取效率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學領(lǐng)域，具體涉及一種磁珠法真菌基因組DNA提取試劑盒。

背景技術(shù)

在分子生物學實驗中，核酸提取是一項最基本且最重要的環(huán)節(jié)，核酸提取的產(chǎn)量、純度及完整性直接關(guān)系到下游核酸檢測、生物學研究或其他新產(chǎn)品開發(fā)的成敗。磁珠法核酸提取方法是指以超順磁性氧化硅納米磁性微珠(以下簡稱磁珠)為載體，通過磁珠在高鹽溶液中吸附核酸，經(jīng)過磁性分離和漂洗雜質(zhì)后，在低鹽溶液中核酸從磁珠表面解吸附的原理進行核酸提取的方法。該方法不需離心，操作簡單，便于高通量、自動化操作，可以使核酸提取效率顯著升高，已成為目前新興的核酸提取技術(shù)。

目前基因組DNA提取純化的方法有很多種，如苯酚氯仿抽提法、SDS法、離心柱法等，但上述方法存在提取試劑有毒，操作繁瑣，易導致污染等問題，而磁珠法不使用有毒試劑，操作簡單，不易污染，已經(jīng)成為目前分子生物學和臨床檢驗醫(yī)學研究的理想方法。

磁珠法對于真菌基因組DNA提取同樣有效，但由于真菌細胞壁成分復雜，提取過程中難以使真菌得到充分裂解，真菌中富含的多糖、色素、核酸酶等物質(zhì)使得核酸的分離更加困難。已報道的真菌破壁方法有：液氮凍融、-70℃凍融、酶消解、超聲破碎、高鹽溶液、尿素緩沖液處理等等，但是上述方法均有其缺陷，例如凍融處理不適合配合核酸提取儀使用；酶消解前處理復雜；超聲破碎存在標本間污染的可能；高鹽溶液、尿素緩沖液處理的檢測限較高，檢測結(jié)果不理想；

此外，傳統(tǒng)的CTAB法是提取的真菌基因組DNA較常見的方法，其主要原理為CTAB是一種陽離子去污劑，可與蛋白質(zhì)形成絡(luò)合物，沉淀蛋白質(zhì)物質(zhì)，達到分離純化核酸的目的，再經(jīng)過酚、氯仿等物質(zhì)的純化離心、洗滌、洗脫等步驟后實現(xiàn)對DNA的提取工作。但是針對多糖含量較高的產(chǎn)菌核真菌的DNA提取無法達到理想的效果。

因此尋找一種有效裂解真菌、高效提取真菌基因組DNA的磁珠法真菌基因組DNA提取試劑盒是目前丞待解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容

具體的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種磁珠法真菌基因組DNA提取裂解液，其成分和含量如下：

進一步的，本發(fā)明提供一種磁珠法真菌基因組DNA提取試劑盒，包括上述的裂解液，還包括磁珠、RNase A溶液、前處理溶液A、清洗液I、清洗液II、洗脫液，其中：

所述磁珠為超順磁性氧化硅納米磁性微珠；

所述清洗液I的成分和含量如下：

所述清洗液II為75％乙醇；

所述洗脫液的成分和含量如下：

緩沖液 0.04～0.05mol/L

EDTA 0.004～0.04mol/L；

所述前處理溶液A成分和含量如下：

SDS 10％-20％

非離子表面活性劑 2％-6％