[發(fā)明專利]一種調(diào)控hsa-MIR-4638的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202211006870.0
• 申請日: 2022-08-22
• 公開（公告）號: CN116024262A
• 公開（公告）日: 2023-04-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王亞帝;何東寧;宋慧娟;李琪;陳書睿;谷澤慧;譚琦;黃利丹
• 申請（專利權(quán)）人: 錦州醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/113;C12Q1/66;C12N15/10
• 代理公司: 長春眾邦菁華知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 22214
• 代理人: 周蕾

本發(fā)明涉及一種調(diào)控hsa?MIR?4638的方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供的一種調(diào)控hsa?miR?4638的方法，該方法確定了P53和hsa?miR?4638的靶向調(diào)控關(guān)系，為進(jìn)一步研究它們在心肌細(xì)胞損傷的作用及分子機(jī)制奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。本發(fā)明還通過突變位點(diǎn)載體構(gòu)建，定點(diǎn)突變此序列后再進(jìn)行雙螢光素酶檢測實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證，得知P53和hsa?miR?4638的靶向調(diào)控中，MIR4638?1號活性最高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種調(diào)控hsa-MIR-4638的方法。

背景技術(shù)

P53是最常發(fā)生突變的腫瘤抑制因子之一，它參與調(diào)節(jié)蛋白編碼基因和非編碼RNA等多種生物學(xué)過程，主要在轉(zhuǎn)錄水平發(fā)揮作用，但也可通過非轉(zhuǎn)錄過程發(fā)揮作用。MIRNA可作為P53應(yīng)激反應(yīng)途徑的關(guān)鍵介質(zhì)，P53調(diào)節(jié)MIRNA的轉(zhuǎn)錄和加工，而MIRNA調(diào)節(jié)P53的活性和表達(dá)。因此，二者之間存在各種反饋/前反饋環(huán)。

通過生物信息學(xué)預(yù)測P53與hsa-MIR-4638存在結(jié)合位點(diǎn)，但是hsa-MIR-4638是否受P53調(diào)控，并參與心肌細(xì)胞損傷的作用及機(jī)制未見相關(guān)研究。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種調(diào)控hsa-MIR-4638的方法，該方法確定了P53和hsa-MIR-4638的靶向調(diào)控關(guān)系，為進(jìn)一步研究它們在心肌細(xì)胞損傷的作用及分子機(jī)制奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案具體如下：

本發(fā)明提供一種調(diào)控hsa-MIR-4638的方法，該方法是通過P53調(diào)控hsa-MIR-4638表達(dá)的方法。

在上述技術(shù)方案中，優(yōu)選的是，所述hsa-MIR-4638的擴(kuò)增序列為以下序列中的一種：

MIR4638-1KpnIF:5'CGGGGTACCGCATCTGCCGAATCACCTGGACCATATTGG?3'；

MIR?4638-2KpnIF:5'CGGGGTACCCTACAAGGGCGCTTGCCTAGAGC?3'；

MIR4638-3KpnIF:5'CGGGGTACCCGGGAGATTCTCTCCCGAGGCCGGC3'；

MIR4638-4KpnIF:5'CGGGGTACCCTTCGGAGGAACACGGACTGGGGCA3'。

進(jìn)一步優(yōu)選的是，所述hsa-MIR-4638的擴(kuò)增序列為以下序列：

MIR4638-1KpnIF:5'CGGGGTACCGCATCTGCCGAATCACCTGGACCATATTGG?3'。

在上述技術(shù)方案中，優(yōu)選的是，所述方法包括以下步驟：

步驟一、構(gòu)建MIR-4638載體

分別構(gòu)建以下MIR-4638-1-4號擴(kuò)增序列的質(zhì)粒；

MIR4638-1KpnIF:5'CGGGGTACCGCATCTGCCGAATCACCTGGACCATATTGG?3'；

MIR?4638-2KpnIF:5'CGGGGTACCCTACAAGGGCGCTTGCCTAGAGC?3'；

MIR4638-3KpnIF:5'CGGGGTACCCGGGAGATTCTCTCCCGAGGCCGGC3'；

MIR4638-4KpnIF:5'CGGGGTACCCTTCGGAGGAACACGGACTGGGGCA3'；

步驟二、雙熒光素酶基因報告檢測