[發明專利]一種貓杯狀病毒LAMP熒光檢測組合物及其LAMP熒光檢測法

在審

• 申請號: 202211001610.4
• 申請日: 2022-08-19
• 公開（公告）號: CN115386657A
• 公開（公告）日: 2022-11-25
• 發明（設計）人: 金霞;胡彬;劉杰;楊欽;黃文鶯
• 申請（專利權）人: 杭州迅靈生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
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1.一種貓杯狀病毒LAMP熒光檢測組合物，其特征在于，由正向內引物FIP、反向內引物BIP、正向外引物F3、反向外引物B3、反向環引物LB與探針LF、LF-Q組成；各引物序列具體如下：

FIP: 5’-TGGCGGGTAGTTCGTCTAACCT-TGGTTCACCTGTGCCACTA-3’；

BIP: 5’-（bio）GGTGTTTGATTTGGCCTGGGC-TGGCTTGAAACTGTCCTGTT-3’；

F3: 5’-TCCGCACTAGGTGTGTGTA-3’；

B3: 5’-CACATCATATGCGGCTCTGA-3’；

LB: 5’-TCTTCGCCGTCACCTGAC-3’；

LF: 5’-（FAM）GTCAGTGCAGGCTCCCGTACGCTATCATTGACAATCT(THF)CCCTTAATG--3’ （C3-SPACER）；

LF-Q：5’-ACGGGAGCCTGCACTGAC-3’（BHQ1）。

2.根據權利要求1所述的一種貓杯狀病毒LAMP熒光檢測組合物，其特征在于，所述探針LF與LF-Q替換為LF’，其中LF’的序列為：

LF: 5’-（BHQ1）ATTGCGGGAGATGAGACCCGCAA（FAM-dT）ACGCTATCATTGACAATCT(THF)CCCTTAATG-3’ （C3-SPACER）。

3.根據權利要求1或2所述的一種貓杯狀病毒LAMP熒光檢測組合物，其特征在于：所述反向內引物BIP設有生物鎖。

4.一種貓杯狀病毒LAMP熒光檢測法，其特征在于，采用權利要求3所述的貓杯狀病毒LAMP熒光檢測組合物，具體檢測方法如下：

12.5ul 2×buffer（1.6M甜菜堿，40 mM Tris-HCl (pH 8.8), 20 mM KCl, 20 mM(NH4)2SO4, and 0.2% Tween 20)，5 pmol F3 ，5pmol B3, 40 pmol FIP primers，40pmol biotin-BIP，16pmol LB，16pmol LF和16pmol的LF-Q 1ul Bst 2.0 DNA polymerase，8.4 mM MgSO4， 1.2 uM dNTPs ，1ul Endo IV ，1ul AMV，加入模板2ul，其余加水補充至25ul；

放置在GS8恒溫熒光PCR儀器中，20cycles 60℃ 60s 讀取FAM熒光，反應結束后取10ul的產物加入190ul的水中，振蕩混勻，滴管取約60ul液體加入核酸試紙條中，5min觀察結果。

5.根據權利要求4所述的一種貓杯狀病毒LAMP熒光檢測法，其特征在于，將所述的16pmol LF和16pmol的LF-Q替換為16pmol LF’。