[發明專利]具有增強的細胞毒性的修飾的天然殺傷細胞和天然殺傷細胞系

在審

• 申請號: 202211000656.4
• 申請日: 2016-07-28
• 公開（公告）號: CN116064401A
• 公開（公告）日: 2023-05-05
• 發明（設計）人: 邁克爾·埃蒙·彼得·奧德懷爾
• 申請（專利權）人: 昂克醫療有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/113;C12N15/85;A61K35/17;A61K31/69;A61K39/00;A61P35/00;A61P35/02;C12R1/91
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 張晶;蔣洪之

對NK細胞和NK細胞系進行修飾以增加細胞毒性，其中細胞及其組合物用于治療癌癥。產生修飾的NK細胞和NK細胞系是通過基因修飾以除去檢查點抑制性受體表達和/或添加突變(變體)TRAIL配體表達。

本申請是申請日為2016年7月28日、中國專利申請號為201680049392.8且發明名稱為“具有增強的細胞毒性的修飾的天然殺傷細胞和天然殺傷細胞系”的中國專利申請的分案申請，并且本申請要求享有EP?15178899.9、GB?1603655.0、GB?1605457.9和GB1610164.4的優先權。

技術領域

本發明涉及修飾天然殺傷(NK)細胞和NK細胞系以產生具有更多細胞毒性表型的衍生物。此外，本發明涉及生產修飾的NK細胞和NK細胞系的方法、含有所述細胞和細胞系的組合物以及所述組合物在治療癌癥中的用途。

背景技術

通常，免疫細胞在觸發導致靶細胞死亡的免疫應答之前需要靶細胞經由主要組織相容性復合體(MHC)呈遞抗原。這使得不呈遞MHC?I類的癌細胞能夠逃避大部分免疫應答。

然而，NK細胞能夠在不存在MHC?I類表達的情況下識別癌細胞。因此，它們在人體對抗癌癥的防御中發揮著關鍵作用。

另一方面，在某些情況下，癌細胞通過表達結合NK細胞膜上的抑制性受體的配體表現出抑制NK細胞的細胞毒活性的能力。對癌癥的抵抗可以涉及這些和其他因素之間的平衡。

細胞毒性在本文中是指免疫效應細胞(例如，NK細胞)通過例如釋放溶細胞的化合物或通過結合癌細胞膜上的受體以及誘導所述癌細胞的凋亡來誘導癌細胞死亡的能力。細胞毒性不僅受到誘導溶細胞化合物的釋放的信號的影響，而且受到抑制其釋放的信號的影響。因此，如上所述，細胞毒性的增加將導致更有效地殺死癌細胞，癌細胞抑制NK的細胞毒活性的可能性更小。

作為增加NK細胞對缺乏MHC?I類表達但能夠抑制NK細胞毒性的癌細胞的細胞毒性的方法，已經提出了去除NK細胞上的抑制性受體功能的基因修飾(Bodduluru?etal.2012)。NKG2A已被確定為在這些情況下值得沉默的抑制性受體，因為已知某些癌細胞表達結合NKG2A并在不存在MHC?I類表達的情況下抑制NK細胞的細胞毒性的MICA(Shook?etal.2011；WO?2006/023148)。

在NK-92細胞中已經顯示了下調NKG2A表達的另一種方法，其中用編碼IL-15的基因轉染顯示與NKG2A表達的降低相關(Zhang?et?al.2004)。然而，盡管觀察到NK細胞的細胞毒性增加，但該增加可能是活化受體NKG2D的表達伴隨增加的結果。這得到NK-92細胞上阻斷NKG2A受體與對多發性骨髓瘤細胞的細胞毒性增加無關的觀察結果的支持(Heidenreichet?al.2012)。盡管如此，值得注意的是NK-92細胞系是具有非常低抑制性受體表達的高細胞毒性細胞系。因此，與NKG2A表達降低有關的細胞毒性的任何增加可能太小而無法檢測。

類似的研究已經在小鼠中進行。例如，小鼠在NK細胞上表達稱為Ly49的受體，其類似于人類抑制KIR受體。已經表明，通過用抗體片段阻斷Ly49受體，NK細胞具有更強的細胞毒性，并且能夠在體外和體內殺死鼠白血病細胞(Koh?et?al.2001)。

這是減少抑制性受體功能的結果，然而，體內的“正?！奔毎哺菀资艿叫揎椀腘K細胞的攻擊，因為修飾的NK細胞不能區分“正常”細胞和癌細胞。這是減少“經典”抑制性受體功能的重大缺點。

已知NK細胞殺死癌細胞的另一種方式是通過在其表面上表達TRAIL。TRAIL配體能夠結合癌細胞上的TRAIL受體并誘導所述癌細胞的凋亡。一種推測方法描述了在NK細胞上過度表達TRAIL，以利用這種抗癌機制(EP1621550)。此外，據報道IL-12上調TRAIL在NK細胞上的表達(Smyth?et?al.2001)。