[發明專利]一種多級在線能量分辨質譜法及其在結構精準鑒定中的應用

在審

• 申請號: 202211000624.4
• 申請日: 2022-08-19
• 公開（公告）號: CN115184530A
• 公開（公告）日: 2022-10-14
• 發明（設計）人: 宋月林;李軍;曹妍;屠鵬飛;李瑋
• 申請（專利權）人: 北京中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/72
• 分類號: G01N30/72
• 代理公司: 北京中和立達知識產權代理有限公司 11756
• 代理人: 鄭茹

1.一種多級在線能量分辨質譜法(online ER²-MS)，其特征在于：所述質譜法采用具有雙碰撞池的質譜系統，所述多級在線能量分辨質譜法具有兩個分析維度，所述質譜法包括以下步驟：

首先第一個維度采用在線能量分辨質譜法基于多反應監測(MRM)模式構建相關離子的裂解曲線，通過高斯曲線擬合，建立最佳碰撞能(OCE)與亞結構連接方式的相關關系；

然后第二個維度采用碰撞誘導解離后能量分辨質譜法(post-CID ER-MS)基于三級質譜(MS³)模式或三級多反應監測(MRM³)模式構建相關離子的裂解曲線，通過與對照品比對或建立激發能與結構的相關關系，鑒定化學成分的亞結構。

2.根據權利要求1所述的質譜法，其特征在于：第一維online ER-MS(1^st online ER-MS)是在線能量分辨質譜法，采用HPLC-Qtrap-MS系統中的MRM模式對所述待測化合物進行檢測，構建相關離子豐度與碰撞能的關系曲線，應用量子化學計算候選結構的鍵長和鍵解離能，構建定量結構-碰撞能關系模型，揭示亞結構連接方式信息。

3.根據權利要求1或權利要求2所述的質譜法，其特征在于：第二維online ER-MS(2^ndonline ER-MS)是碰撞誘導解離后能量分辨質譜法(post-CID ER-MS)，采用HPLC-Qtrap-MS系統中的MS³模式對所述待測化合物進行檢測，構建相關離子豐度與激發能的關系曲線，表征所述待測化合物的亞結構信息。

4.根據權利要求1至3中任一項所述的質譜法，其特征在于：在所述質譜法中使用的流動相、色譜柱型號、流速、柱溫、洗脫程序以及進樣量根據所述待測化合物進行調整。

5.根據權利要求1至4中任一項所述的質譜法，其特征在于：離子源的參數設置如下：離子源溫度：400-550℃，負離子模式下噴霧電壓設為-4500V；碰撞氣(CAD)為High；氣簾氣(Curtain Gas)范圍為25-35psi；GS1和GS2為15-55psi；其中，氣簾氣、GS1、GS2和離子源溫度根據流速大小調整。

6.根據權利要求1至5中任一項所述的質譜法，其特征在于：1^st online ER-MS采用多反應監測(MRM)掃描模式，射入電壓(EP)為-10V；碰撞室射出電壓(CXP)為-16V。構建一系列擬離子對(PITs)，對應一組遞進CE值，–30-–80eV，Step設定為1eV，以響應值為縱坐標，遞進式碰撞能為橫坐標，進一步通過GraphPad Prism 8.0進行高斯曲線擬合，獲得目標離子的最佳碰撞能(OCE)；通過Sigmoid曲線擬合，獲得目標離子的半數響應碰撞能(CE₅₀)。

7.根據權利要求1至6中任一項所述的質譜法，其特征在于：2^nd online ER-MS采用第三級質譜(MS³)掃描模式，掃描速度為10000Da/s；線性離子阱固定填充時間(Fixed LIT filltime)為10ms；激發時間(Excitation Time)為25ms；設置16個MS³ experiments，對應一組遞進AF2值，0.005-0.175V，Step設定為0.01V，以響應值為縱坐標，遞進式激發能為橫坐標，進一步通過GraphPad Prism 8.0進行高斯曲線擬合，獲得目標離子的最佳激發能；通過Sigmoid曲線擬合，獲得目標離子的半數響應激發能。

8.權利要求1至7中任一項所述的質譜法在復雜體系中未知化合物化學結構準確鑒定中的應用。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于：所述未知化合物優選膽汁酸類化合物。

10.根據權利要求8或權利要求9所述的應用，其特征在于：所述復雜體系包括生物試劑、藥品、食品和臨床樣品。