[發(fā)明專利]一種改善反芻動物胴體品質(zhì)的突變酶復合制劑及其應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210992407.1
• 申請日: 2022-08-18
• 公開（公告）號: CN115927258A
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發(fā)明（設計）人: 呂東海;成艷芬;唐志剛
• 申請（專利權(quán)）人: 南京諾齊生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12N9/24;C12N15/70;A23K20/168;A23K20/189;A23K50/10
• 代理公司: 青島合創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙) 37264
• 代理人: 王曉曉

本發(fā)明公開了一種改善反芻動物胴體品質(zhì)的突變酶復合制劑及其應用。所述突變酶復合制劑是以植物甾醇、內(nèi)切葡聚糖酶酶液和纖維素酶?木聚糖酶雙功能酶酶液以3:1～3:2～4的體積比混合而成的，其中內(nèi)切葡聚糖酶酶液是由內(nèi)切葡聚糖酶突變體TrepCel3?Aa制備得到的，纖維素酶?木聚糖酶雙功能酶酶液是由纖維素酶?木聚糖酶雙功能酶突變體CelXyn2?S343制備得到的。所述突變酶復合制劑的制備工藝簡單，經(jīng)實驗證實，其具有明顯的提高奶牛和湖羊瘤胃中揮發(fā)性脂肪酸產(chǎn)量的作用，且能提高湖羊瘤胃底物降解率、產(chǎn)氣量，并降低肌內(nèi)脂肪含量，進而明顯改善反芻動物的胴體品質(zhì)。

技術(shù)領域

本發(fā)明屬于生物工程領域，具體涉及一種改善反芻動物胴體品質(zhì)的突變酶復合制劑及其應用。

背景技術(shù)

植物固醇，是以游離狀態(tài)或與脂肪酸和糖等結(jié)合的狀態(tài)存在的一種功能性成分，廣泛存在于蔬菜、水果等各種植物的細胞膜中，其對人體健康有很多益處，有防治前列腺肥大、抑制腫瘤、抑制乳腺增生和調(diào)節(jié)免疫等作用，還可以與膽固醇競爭，減少膽固醇吸收。

隨著宏基因組篩選方法的廣泛運用，目前已有多種內(nèi)切葡聚糖酶從草食動物的瘤胃中獲得，如駝鹿、綿羊、水牛、奶牛和駱駝。但是大部分候選纖維素酶沒有被克隆和表征。內(nèi)切葡聚糖酶通過底物結(jié)合口袋與底物錨定，進一步被活性催化位點催化。因此，挖掘瘤胃微生物宏基因組中內(nèi)切葡聚糖酶可以為內(nèi)切葡聚糖酶的開發(fā)提供新的研究思路，同時對底物結(jié)合口袋進行適當?shù)亩c突變，提高酶與底物結(jié)合穩(wěn)定性。

另外，纖維素酶和木聚糖酶的混合使用已經(jīng)廣泛用于木材生物制漿、造紙、紡織、農(nóng)業(yè)廢物處理、生物燃料和果汁加工等工業(yè)應用。然而，這種組合在反芻動物中幾乎沒有被用作飼料添加劑。但是多酶復合使用會提高經(jīng)濟成本，為此，雙功能酶的應用有望解決此問題。因此，挖掘雙功能酶與一些天然成分的組合可以為該酶的更好提供新的思路，同時將纖維素酶-木聚糖酶制劑用作飼料酶制劑，提高飼料轉(zhuǎn)化率，有利于動物的生長。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種改善反芻動物胴體品質(zhì)的突變酶復合制劑及其應用。所述突變酶復合制劑具有明顯改善反芻動物胴體品質(zhì)的作用，有利于動物的生長和養(yǎng)殖。

為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)：

本發(fā)明提供了一種突變酶復合制劑，所述突變酶復合制劑中含有植物甾醇、內(nèi)切葡聚糖酶酶液和纖維素酶-木聚糖酶雙功能酶酶液。

進一步的，所述植物甾醇、內(nèi)切葡聚糖酶酶液和纖維素酶-木聚糖酶雙功能酶酶液的體積比為3:1～3:2～4。

進一步的，所所述內(nèi)切葡聚糖酶酶液是由氨基酸序列如SEQ?ID?No.2所示的內(nèi)切葡聚糖酶突變體TrepCel3-Aa制備得到的；所述纖維素酶-木聚糖酶雙功能酶酶液是由氨基酸序列如SEQ?ID?No.5所示的纖維素酶-木聚糖酶雙功能酶突變體CelXyn2-S343制備得到的。

進一步的，所述內(nèi)切葡聚糖酶突變體TrepCel3-Aa是由氨基酸序列為SEQ?ID?No.1的內(nèi)切葡聚糖酶的第124位的纈氨酸突變?yōu)樯彼嵋约暗?28位的絲氨酸突變?yōu)槔野彼岖@得的。

進一步的，所述纖維素酶-木聚糖酶雙功能酶突變體CelXyn2-S343是由氨基酸序列為SEQ?ID?No.4的纖維素酶-木聚糖酶雙功能酶的第343位的半胱氨酸突變成絲氨酸獲得的。

本發(fā)明還提供了所述的突變酶復合制劑在制備用于改善反芻動物胴體品質(zhì)的飼料添加劑中的應用。

進一步的，所述內(nèi)切葡聚糖酶突變體和纖維素酶-木聚糖酶雙功能酶突變體的酶活均不低于500U/mL。

進一步的，所述突變酶復合制劑的添加量為100g/t～200g/t飼料。

進一步的，所述突變酶復合制劑能夠明顯提高反芻動物瘤胃中揮發(fā)性脂肪酸的產(chǎn)量，并降低肌內(nèi)脂肪含量。